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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--黄灯笼辣椒eIF4Es基因的克隆及其与PVMV-VPg互作研究
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黄灯笼辣椒eIF4Es基因的克隆及其与PVMV-VPg互作研究
 
     论文目录
 
摘要第4-5页
Abstract第5-6页
1 前言第9-21页
    1.1 马铃薯Y病毒属病毒概述第10-12页
        1.1.1 甜椒脉斑驳病毒(PVMV)症状表现第10页
        1.1.2 马铃薯Y病毒属基因组结构和功能研究第10-12页
    1.2 植物抗病毒基因工程研究第12-13页
        1.2.1 来源于病毒的抗性基因策略第12-13页
        1.2.2 非病毒基因来源的抗性策略研究第13页
    1.3 真核翻译起始因子的相关研究第13-17页
        1.3.1 真核翻译起始因子4E的结构第13-14页
        1.3.2 eIF4E参与真核生物蛋白质翻译的起始第14-15页
        1.3.3 eIF4E参与抗病毒的机制第15-16页
        1.3.4 马铃薯Y病毒属病毒与eIF4E家族成员的结合具有选择性第16-17页
    1.4 本研究的关键技术方法第17-19页
        1.4.1 酵母双杂交技术第17-18页
        1.4.2 荧光双分子互补技术第18-19页
        1.4.3 基因编辑技术第19页
    1.5 本研究的目的及意义第19-20页
    1.6 本研究的技术路线第20-21页
2 材料与方法第21-39页
    2.1 材料与试剂第21-23页
        2.1.1 植物材料第21页
        2.1.2 菌株与质粒第21页
        2.1.3 表达载体第21-22页
        2.1.4 主要的酶和生化试剂第22-23页
        2.1.5 仪器设备第23页
    2.2 方法第23-39页
        2.2.1 黄灯笼辣椒样品叶片总RNA提取第23-24页
        2.2.2 黄灯笼辣椒样品叶片cDNA合成第24页
        2.2.3 反转录产物可靠性检验第24-25页
        2.2.4 引物设计第25页
        2.2.5 PCR扩增程序第25-26页
        2.2.6 eIF4E家族4个基因目的片段回收纯化、连接、转化第26页
        2.2.7 酵母诱饵载体的构建第26-28页
        2.2.8 酵母激活域载体的构建第28-30页
        2.2.9 酵母双杂交(LexA系统)菌株EGY48 (p8op-LacZ)表型鉴定第30页
        2.2.10 重组激活域质粒转化EGY48(p8op-LacZ)酵母感受态细胞第30页
        2.2.11 转化酵母的菌落PCR鉴定第30-31页
        2.2.12 激活域质粒的自激活活性检测第31页
        2.2.13 激活域质粒的毒性检测第31页
        2.2.14 诱饵质粒转化EGY48 (p8op-LacZ)酵母感受态细胞第31页
        2.2.15 菌落PCR鉴定第31页
        2.2.16 诱饵质粒的自激活活性检测第31页
        2.2.17 诱饵质粒对EGY48酵母菌的毒性检测第31-32页
        2.2.18 诱饵质粒和激活域质粒同时转化EGY48 (p8op-LacZ)菌株第32页
        2.2.19 酵母菌株阳性克隆的筛选第32页
        2.2.20 酵母阳性克隆的验证第32-33页
        2.2.21 双分子荧光互补载体的构建第33-36页
        2.2.22 EHA105农杆菌感受态细胞制备第36页
        2.2.23 BiFC重组表达质粒转化农杆菌感受态细胞第36-37页
        2.2.24 注射烟草第37-39页
3 结果与分析第39-53页
    3.1 黄灯笼辣椒eIF4E家族基因的克隆第39-44页
        3.1.1 黄灯笼辣椒嫩叶总RNA提取第39页
        3.1.2 黄灯笼辣椒eIF4E家族4个基因的克隆第39-40页
        3.1.3 黄灯笼辣椒eIF4E家族4个基因全长ORF分析第40-44页
    3.2 酵母双杂交鉴定蛋白互作结果第44-49页
        3.2.1 酵母双杂交激活域载体pB42AD-eIF4E/eIF(iso)4E/eIF4E-Xm/ nCBP9090的构建及鉴定第44-45页
        3.2.2 酵母双杂交诱饵载体pLexA-VPg的构建及鉴定第45页
        3.2.3 激活域载体的毒性及自激活活性检测第45-46页
        3.2.4 诱饵载体的毒性及自激活活性检测第46-47页
        3.2.5 酵母双杂交系统阳性克隆筛选第47-48页
        3.2.6 酵母双杂交系统阳性克隆的验证第48-49页
    3.3 双分子荧光互补技术进一步验证eIF4E家族因子与PVMV-VPg的互作第49-53页
        3.3.1 目的基因的扩增第49页
        3.3.2 目的基因PCR扩增第49-50页
        3.3.3 双分子荧光互补表达载体的构建第50页
        3.3.4 重组质粒转化农杆菌EHA105第50-51页
        3.3.5 农杆菌注射烟草的蛋白互作检测第51-53页
4 讨论第53-57页
    4.1 黄灯笼辣椒eIF4E家族成员的分析第53页
    4.2 黄灯笼辣椒Cc-eIF4E和Cc-eIF(iso)4E抗病位点的预测第53-54页
    4.3 Y2HS和BiFC研究黄灯笼辣椒eIF4E家族蛋白与PVMV-VPg之间的互作第54-55页
    4.4 以黄灯笼辣椒eIF4E为靶点进行基因编辑培育抗PVMV新品系的可行性第55-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-65页
附录第65-68页
    附录一 缩略词表第65-66页
    附录二 载体图谱第66-68页
本研究获资助项目第68页
发表文章第68-69页
致谢第69页

 
 
论文编号BS4032326,这篇论文共69
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