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研究新会陈皮中总黄酮的提取工艺

【中医中药论文】摘要: 目的 优化新会陈皮总黄酮提取的工艺条件。方法 在单因素试验的基础上,以总黄酮含量为指标,采用正交试验方法考察液固比、乙醇浓度、提取时间等因素。结果 各因素的影响次序是液固比>提取温度>提取时间;最佳提取工艺为:乙醇体积分数为60%,液固比1∶25,提取温度70 ℃,提取时间3 h,提取1次。结论 优选得到的工艺稳定可行。
关键词:新会陈皮;总黄酮;正交设计
Optimization of extraction process of total flavonoids in Xinhui dry orange peel by orthogonal design
LIN Lin,LIN Zi-xia,HUANG Qing-hua
(Section of Analytical Chemistry,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou,Guangdong 510006,China)
Abstract:Objective To optimize extraction process condition for total flavonoids in Xinhui dry orange peel. Methods On the basis of the single experimental factor,the optimized extraction condition on the basis of total flavonoids were determined by orthogonal design. Results The order of factors which affected the total flavonoids’ extraction was: solvent quantity>extraction temperature>extraction duration; The optimum extraction conditions are extraction once with 60% ethanol,solvent ratio 1∶25 at 70 ℃ for 3 hours in water bath. Conclusion The method is simple,convenient,and accurate.
Key words: XinHui dry orange peel; total flavonoids;orthogonal design
陈皮是芸香科植物橘Citus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮,药材分为“陈皮”和“广陈皮”。“广陈皮”为茶枝柑Citus reticulata ‘Chachi’的干燥成熟果皮,主产于广东新会,是广东十大道地药材之一。据报道陈皮的有效成分为黄酮类化合物和挥发油,具有抗衰老、软化心血管、减轻实验动物的动脉粥样硬化等功效[1-4]。影响陈皮总黄酮提取的因素很多,本文选择乙醇体积分数,提取温度,提取时间,液固比和提取次数进行单因素试验,在此基础上采用正交试验,优选得到新会陈皮总黄酮提取的最佳工艺。
1 材料与仪器
TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂),恒温水浴锅,索氏抽提器等。
样品由新会陈皮协会提供,并由广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定为茶枝柑Citus Reticulata Chachi的干燥成熟果皮。样品粉碎成粗粉,置干燥箱于60 ℃烘12 h以上。于闭光、阴凉处存放。橙皮苷(购自中国药品生物制品检定所,批号110712-200512),其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 陈皮总黄酮的提取
称取约5 g陈皮粗粉置250 mL烧瓶中,加入石油醚(30~60 ℃)80 mL,60 ℃回流脱脂2 h;挥干石油醚后,根据实验要求,按照不同的水提取温度、提取时间以不同液固比及提取次数进行提取,抽滤,洗涤滤渣,合并滤液和洗液,浓缩去适量的乙醇,然后转入100 mL量瓶中,定容,摇匀,即为供试品溶液。
2.2 橙皮苷标准曲线的绘制
取0.2274 mg/mL的橙皮苷对照品贮备液,精密吸取0.5、1、1.5、2.0和2.5 mL置25 mL量瓶中,加体积分数为60%的乙醇至刻度。在285 nm处测定吸收度,并绘制标准曲线。结果表明:在4.548~22.74 μg/mL范围内有良好的线性关系,回归方程为A=0.033C+0.013,r=0.9993。
2.3 测定方法
取一定提取条件下所得的供试品溶液,适当稀释,在285 nm处测定样品的吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。以陈皮总黄酮的得率(%)为指标,确定最佳提取条件。
2.4 单因素试验
选取水浴温度、乙醇体积分数、提取时间、液固比、提取次数这5个可能影响提取效果的因素做单因素试验,以确定相关因素对陈皮提取物中黄酮含量的影响,结果见图1。
A.提取温度; B.乙醇体积; C.提取时间; D.液固比; E.提取次数 图1 5种因素对陈皮总黄酮得率的影响(略)
Fig.1 Effect of five factors on the yield of total flavonoids
由图1可以得出:在70 ℃时陈皮总黄酮得率达到最大,故可以确定最佳的提取温度为70 ℃;乙醇体积分数大于60%,陈皮总黄酮得率逐渐减少,故可以确定最佳的乙醇体积分数为60%;提取时间从2 h后得率增长不大,以5 h为最高;液固比在30倍后有显著减少,以25倍为最高;提取1次后得率增长不大,从节省成本和节省溶剂的角度,提取次数为1次。
2.5 正交试验设计优选最佳提取条件
 
通过单因素实验选取影响较大的三个因素:提取时间、提取温度和液固比,运用正交设计实验法,选用三因素三水平来确定陈皮总黄酮提取的最佳条件。实验结果见表1~3。
表1 实验因素水平表(略)
Tab.1 Factors and levels
从表2的直观分析可以看出,3个因素对总黄酮提取含量的 影响次序:液固比、提取温度、提取时间。
从表3的方差分析可以看出,液固比和提取温度对结果有显著性影响,提取时间对结果的影响不显著,从经济、省时的原则考虑,提取时间定为3 h。综合上面的因素,最佳提取工艺:体积分数为60%的乙醇,提取温度70 ℃,液固比1∶25,提取时间3 h,提取1次。
表2 L9(34)正交实验结果与直观分析(略)
Tab.2 Result of L9(34) orthogonal experiment and analysis
表3 L9(34)正交实验方差分析表(略)
Tab.3 ANOVA analysis of L9(34) orthogonal experiment
2.6 验证实验
按上述优化提取条件平行做3份样品,结果稳定,证明该方案可行。
3 讨论
3.1 测定陈皮中总黄酮时,文献大多采用芦丁为对照品和“NaNO2-AlNO3-NaOH”体系,使得吸收峰向高处移动,以减少干扰[5-6] 。但实际上陈皮总黄酮基本不含芦丁,络合后芦丁最大的吸收峰和陈皮总黄酮的吸收峰相差较大。本文用陈皮总黄酮的主要成分橙皮苷为标准品,直接测定。实验结果显示两者的最大吸收波长很接近。该方法简单,易操作,技术成熟,重现性好。
3.2 陈皮总黄酮主要为黄酮苷类,用乙醇提取较水提好,得率高,杂质少,有利于后续的分离,溶剂可回收,适于工业生产。
【参考文献】
[1] 王姝梅,何春兰.陈皮提取物清除氧自由基和抗脂质过氧化作用 [J].中国药科大学学报,1998,29(6):462~465.
[2] 苏丹,秦德安.陈皮提取液抗氧化及延缓衰老作用研究[J].华东师范大学学报:自然科学版,1999(1):100~102.
[3] 李琴山,娄桂予,钱民章,等.橙皮苷与芦丁体外抗高密度脂蛋白氧化修饰的作用[J].中西医结合学报,2004,3(2):115~120.
[4] 赵国华,陈宗道.柑桔类黄酮生物活性的研究进展[J].食品与发酵工业,2001,27(3):71~75.
[5] 房方,张广强,谢新年.用分光光度法进行黄酮类化合物含量测定的研究[J].河南中医药学刊,1997,12(1):17~19.
[6] 颜仁梁,刘志刚.中草药、中药制剂中总黄酮类化合物含量测定方法综述[J].广州医药,2005,36(6):6~10.
 
 
 
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