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昆虫抗冻蛋白基因转化烟草抗寒性功能的研究
 
     论文目录
 
中文摘要第1-6页
ABSTRACT第6-15页
第一部分 文献综述第15-44页
 第一章昆虫抗冻蛋白的研究进展第15-28页
  1 昆虫抗冻蛋白的特点第15-19页
   ·抗冻活性高第15-16页
   ·结构规律第16-19页
  2 昆虫抗冻蛋白的生物学活性研究第19-22页
   ·抗冻蛋白的热滞活性检测第19-20页
   ·昆虫抗冻蛋白的抗冻活性及影响因子第20-21页
   ·昆虫抗冻蛋白作用机制的研究第21-22页
  3 昆虫抗冻蛋白的应用第22-23页
   ·抗冻蛋白在食品工业中的应用第22页
   ·抗冻蛋白在医学上的应用第22-23页
   ·抗冻蛋白的基因工程研究与应用第23页
  4 结论与展望第23页
  参考文献第23-28页
 第二章 植物抗寒性及抗寒基因工程研究进展第28-44页
  1 低温引起植物的膜脂相变及转脂肪酸去饱和酶基因的研究第28-29页
  2 抗氧化系统对低温胁迫的生化响应及转抗氧化酶的研究第29-30页
  3 渗透调节物质的积累及转抗渗透胁迫相关基因第30-31页
  4 低温信号转录因子的表达及转抗寒调控基因第31-32页
  5 低温诱导蛋白及转冷诱导基因的研究第32-33页
  6 具有热滞活性的植物抗冻蛋白及转抗冻蛋白基因的研究第33-34页
  7 结论与展望第34-37页
  参考文献第37-44页
第二部分 研究正文第44-127页
 第一章 烟草高效转化体系的建立第44-55页
  引言第44-45页
  1. 材料与方法第45-47页
   ·材料第45页
   ·无菌苗的获得第45-46页
   ·潮霉素临界值的确定第46页
   ·农杆菌的培养第46页
   ·烟草的转化第46页
   ·浸染时间的确定第46页
   ·生根培养基的确定第46-47页
   ·转基因植株的PCR 检测第47页
   ·烟草种子对潮霉素敏感值的确定第47页
  2 结果与分析第47-51页
   ·潮霉素浓度对分化的影响第47-48页
   ·浸染时间对转化的影响第48-49页
   ·生根筛选培养基的确定第49页
   ·抗性植株的PCR 检测第49-50页
   ·潮霉素浓度对烟草种子萌发的影响第50-51页
  3 讨论第51-53页
  参考文献第53-55页
 第二章 抗冻蛋白基因 MpAFP149 表达载体的构建及抗血清的制备第55-68页
  引言第55-56页
  1 材料与方法第56-60页
   ·材料第56页
   ·生化试剂第56-58页
   ·抗冻蛋白MpAFP149 基因真核表达载体的构建与鉴定第58页
   ·原核表达载体pGEX-4T-1-MpsAFP149 的构建第58页
   ·融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和纯化第58-59页
   ·抗血清的制备第59页
   ·Western blot 检测第59-60页
  2 结果与分析第60-64页
   ·真核表达载体pcDNA3-MpAFP149 的构建第60-61页
   ·抗冻蛋白MpsAFP149(不含信号肽)原核表达载体的构建第61-62页
   ·pGEX4T-1-MpsAFP149 原核表达条件的优化第62-63页
   ·抗冻蛋白的Western blot 检测第63-64页
  3. 讨论第64-66页
  参考文献第66-68页
 第三章 昆虫抗冻蛋白基因转化烟草抗寒性的研究第68-127页
  引言第69-70页
  第一节 昆虫抗冻蛋白基因单价植物表达载体构建及转化烟草抗寒性研究第70-92页
   1 材料和方法第70-77页
   ·材料第70-71页
   ·试剂及仪器第71-72页
   ·昆虫抗冻蛋白的软件预测分析及瞬时表达第72-73页
   ·单价植物表达载体的构建第73-74页
   ·烟草的遗传转化及再生植株的检测第74页
   ·免疫胶体金第74-75页
   ·westernblots第75页
   ·转基因烟草的抗寒性检测第75-76页
   ·低温下细胞器形态结构的观察第76-77页
   2 结果与分析第77-89页
   ·抗冻蛋白MpAFP149 的结构特性第77-78页
   ·MpAFP149 基因与GFP 基因融合表达载体的构建第78-79页
   ·MpAFP149-GFP 融合蛋白在洋葱表皮细胞的亚定位第79-80页
   ·单价植物表达载体pCAMBIA1302-MpAFP149 的构建第80-81页
   ·转基因烟草的PCR、PCR-Southern 及RT-PCR 检测第81-83页
   ·抗冻蛋白MpAFP149 在转基因烟草中的免疫定位及Westernblots第83-84页
   ·转基因植物的抗寒性检测第84-85页
   ·相对电导率和丙二醛含量的测定第85-86页
   ·低温胁迫下抗冻蛋白对烟草亚细胞结构的影响第86-89页
   3 讨论第89-92页
  第二节 昆虫抗冻蛋白基因双价植物表达载体构建及转化烟草抗寒性研究第92-105页
   1 材料和方法第92-95页
   ·材料第92页
   ·生化试剂第92-93页
   ·双价植物表达载体的构建第93-94页
   ·植物双价表达载体的农杆菌转化及鉴定第94页
   ·烟草叶片组织的遗传转化第94页
   ·转基因烟草T1 代种苗的筛选第94页
   ·再生植株的分子生物学检测第94页
   ·柠檬酸合成酶的测定第94页
   ·转基因烟草的抗寒实验第94-95页
   2 结果与分析第95-103页
   ·扩增烟草柠檬酸合成酶基因第95-98页
   ·含有柠檬酸合成酶基因的单双价植物表达载体的构建第98-100页
   ·转基因烟草的PCR 检测第100-101页
   ·烟草柠檬酸合成酶活力的测定第101-102页
   ·转基因植物的抗寒实验第102-103页
   3 讨论第103-105页
  第三节 昆虫抗冻蛋白基因叶绿体表达载体构建及转化烟草抗寒性研究第105-116页
   1 材料和方法第106-109页
   ·材料第106页
   ·叶绿体植物表达载体的构建第106-108页
   ·基因枪转化和转基因的获得第108-109页
   ·转基因植株的PCR 检测第109页
   ·转基因烟草的RT-PCR 分析第109页
   ·转基因烟草的抗寒性检测第109页
   2. 结果与分析第109-115页
   ·叶绿体表达载体的构建与鉴定第109-111页
   ·转基因植株的获得及PCR 检测第111-112页
   ·转基因植株的RT-PCR 检测第112-113页
   ·转基因植株的抗寒性检测第113-115页
   3 讨论第115-116页
  参考文献第116-127页
第三部分 结论与展望第127-129页
附录1 英文缩略语第129-131页
附录2 主要实验仪器第131-132页
个人简介第132-133页
博士及硕士期间已发表和待发表的论文第133-134页
致谢第134-135页

 
 
论文编号BS777126,这篇论文共135
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