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新城疫病毒TS09-C株全长cDNA克隆的构建及荧光定量RT-PCR检测方法的建立
 
     论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-13页
略縮词表第13-14页
第一章 文献综述第14-24页
 1 新城疫研究现状第14-18页
   ·基因组第14页
   ·病毒蛋白研究现状第14-17页
     ·核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein,NP)第14-15页
     ·磷蛋白(Phosphoprotein,P)第15页
     ·基质蛋白(Matrixprotein,M)第15-16页
     ·融合蛋白(Fusionprotein,F)第16页
     ·血凝素-神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin-neuraminidase,HN)第16-17页
     ·大聚合酶蛋白(Large-protein,L)第17页
   ·新城疫病毒培养特性第17-18页
   ·新城疫病毒耐热特性研究第18页
 2 新城疫病毒反向遗传技术研究进展第18-20页
   ·反向遗传技术应用于病毒蛋白功能的研究第19页
   ·新城疫病毒反向遗传技术在肿瘤治疗中的应用第19页
   ·反向遗传技术制备基因工程疫苗第19-20页
 3 荧光定量技术研究进展第20-23页
   ·染料法荧光定量技术第21页
   ·探针法荧光定量技术第21-23页
     ·TaqMan探针法第21-22页
     ·分子信标技术第22页
     ·杂交探针法第22-23页
     ·复合探针法第23页
 4 目的和意义第23-24页
第二章 新城疫病毒耐热株的细胞适应培养第24-34页
 1 材料和方法第24-28页
   ·病毒第24页
   ·细胞及试剂第24页
   ·主要仪器第24-25页
   ·红细胞的制备第25页
   ·BHK细胞培养第25页
   ·TPCK-胰酶浓度的优化第25页
   ·NDV TS09株在BHK细胞上的传代第25-26页
   ·NDV毒株的生物学特性测定第26-27页
     ·血凝活性效价(HA)测定第26页
     ·鸡胚平均致死时间(MDT)测定第26页
     ·脑内致病指数(ICPI)第26页
     ·半数细胞感染剂量(TCID50)和半数鸡胚感染剂量(EID50)第26-27页
   ·NDV毒株F、HN基因的扩增与测序第27页
   ·NDV毒株F、HN基因的序列分析第27-28页
 2 实验结果第28-31页
   ·胰蛋白酶最适浓度的优化第28页
   ·TS09株在BHK细胞中的传代培养第28-30页
   ·TS09-C株F、HN基因的序列测定与分析第30页
   ·NDV毒株F基因的同源性分析第30页
   ·NDV毒株的遗传进化分析第30-31页
 3 讨论第31-34页
第三章 NDV TS09-C株全基因组序列的测定与分析第34-42页
 1 材料方法第34-35页
   ·病毒第34页
   ·酶和试剂第34页
   ·引物设计和合成第34-35页
   ·基因组全长的分段扩增和测序第35页
   ·NDV TS09-C株全基因组序列的分析第35页
 2 结果第35-40页
   ·PCR扩增结果第35-36页
   ·序列分析第36-39页
     ·全基因组基因结构特点分析第36-37页
     ·同源性分析第37页
     ·系统进化分析第37页
     ·HN蛋白糖基化位点分析第37-39页
   ·耐热分析第39-40页
     ·氨基酸差异性分析第39页
     ·二级结构分析第39-40页
 3 讨论第40-42页
   ·引物设计第40页
   ·序列分析第40-41页
   ·耐热分析第41-42页
第四章 NDV TS09-C株全长cDNA克隆的构建第42-55页
 1 材料和方法第42-50页
   ·酶和试剂第42页
   ·引物设计第42-43页
   ·NDV TS09-C株全长cDNA克隆构建策略第43-47页
     ·pBR-ABC质粒的构建方案第44-45页
     ·pBR-DE和pBR-FG质粒的构建方案第45-46页
     ·全长质粒pBR-TS09-C的构建方案第46-47页
   ·病毒RNA的提取、反转录及PCR第47页
   ·引物自延伸反应第47页
   ·融合PCR第47页
   ·酶切反应第47-48页
   ·连接反应第48-49页
   ·DH5α感受态细胞的制备第49页
   ·转化实验第49页
   ·测序分析第49-50页
   ·质粒稳定性测定第50页
 2 结果第50-53页
   ·目的片段的扩增第50页
   ·构建各质粒的酶切鉴定第50-52页
   ·测序分析第52页
   ·质粒稳定性试验第52-53页
 3 讨论第53-55页
   ·全长cDNA克隆的构建思路第53页
   ·PCR扩增以及产物的连接第53页
   ·质粒的酶切鉴定及测序第53-55页
第五章 新城疫荧光定量检测的建立第55-63页
 1 材料方法第55-57页
   ·病毒和样品第55页
   ·试剂和主要仪器第55页
   ·引物及探针的设计合成第55-56页
   ·病毒、细菌核酸提取第56页
   ·荧光RT-PCR方法的建立第56页
   ·标准品的制备第56页
   ·灵敏性试验及标准曲线的绘制第56页
   ·临床应用第56-57页
 2 结果第57-61页
   ·荧光反应条件的优化第57-59页
   ·灵敏性实验第59页
   ·特异性实验第59-60页
   ·重复性实验第60-61页
   ·临床样品检测结果第61页
 3 讨论第61-63页
结论第63-64页
参考文献第64-74页
致谢第74-75页
附录 硕士期间发表文情况第75页

 
 
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