| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 引言 | 第15-24页 |
| 1 刺参（Apostichopus japonicus）的概述 | 第15页 |
| 2 甲基化简介 | 第15-18页 |
| ·甲基化的作用机制 | 第16-17页 |
| ·DNA 去甲基化 | 第17页 |
| ·DNA 甲基化的生物学作用 | 第17页 |
| ·甲基化研究进展 | 第17-18页 |
| 3 DNA 甲基化研究技术 | 第18-22页 |
| ·甲基化敏感扩增片段多态性 (Methylation-sensitive Amplified Polymorphism, MSAP)技术 | 第18-20页 |
| ·MSAP 技术原理 | 第18-19页 |
| ·MSAP 技术的优缺点 | 第19-20页 |
| ·高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)技术 3.2.1 HPLC 技术原理 | 第20页 |
| ·HPLC 技术原理 | 第20页 |
| ·HPLC 技术的优缺点 | 第20页 |
| ·SssI 甲基转移酶法 | 第20页 |
| ·免疫化学法 | 第20-21页 |
| ·氯乙醛法 | 第21页 |
| ·特定 DNA 片段甲基化检测 | 第21-22页 |
| ·基于重亚硫酸盐处理靶 DNA 法 | 第21页 |
| ·亚硫酸氢化测序与限制性分析 | 第21页 |
| ·甲基化敏感性单核苷酸引物延伸 | 第21-22页 |
| ·荧光探针杂交法 | 第22页 |
| 4. 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第一章 MSAP 技术分析刺参不同组织基因组 DNA 甲基化状态 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| ·实验样品 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·接头和引物 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·DNA 提取 | 第26页 |
| ·酶切反应 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·预扩增 | 第27-28页 |
| ·选择性扩增 | 第28-29页 |
| ·电泳检测与条带统计 | 第29页 |
| ·配制非变性聚丙烯酰胺胶 | 第29页 |
| ·凝胶电泳 | 第29页 |
| ·条带统计 | 第29页 |
| ·数据统计与分析 | 第29-30页 |
| 2 实验结果 | 第30-32页 |
| ·刺参不同组织的甲基化状态 | 第30-32页 |
| ·不同组织间的甲基化概率 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 第二章 甲基化特异位点的克隆与筛选 | 第34-40页 |
| 1 材料与主要试剂 | 第34页 |
| ·实验样品 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-38页 |
| ·实验前期准备 | 第34-35页 |
| ·MSAP 图谱的获得 | 第35页 |
| ·回收特异条带 | 第35-36页 |
| ·特异片段克隆 | 第36-38页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·转化克隆 | 第36-38页 |
| ·测序 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论与小结 | 第39-40页 |
| 第三章 高氯酸水解 DNA 样品的 HPLC 检测 | 第40-48页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第40-41页 |
| ·实验样品 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| 2 方法与结果 | 第41-46页 |
| ·标准溶液和流动相的配制 | 第41-42页 |
| ·标准溶液的配制 | 第41页 |
| ·流动相的配制 | 第41-42页 |
| ·水解条件的设置 | 第42-43页 |
| ·高氯酸添加量的设置 | 第42页 |
| ·水解时间、温度的设置 | 第42-43页 |
| ·DNA 的处理与水解 | 第43页 |
| ·DNA 处理 | 第43页 |
| ·高氯酸水解 | 第43页 |
| ·HPLC 进样分析 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| ·色谱条件的探讨 | 第46页 |
| ·水解温度、时间对样品的影响 | 第46-47页 |
| ·pH 对检测结果的影响 | 第47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 核酸酶水解刺参 DNA 样品的 HPLC 检测 | 第48-54页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·实验准备 | 第49-50页 |
| ·标准溶液配制 | 第49页 |
| ·试剂配制 | 第49-50页 |
| 2 方法与结果 | 第50-53页 |
| ·实验方法 | 第50-51页 |
| ·DNA 前处理 | 第50页 |
| ·DNA 水解 | 第50页 |
| ·HPLC 检测 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-53页 |
| 3 讨论与小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 已完成文章 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
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