| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 漆酶的研究概况 | 第7-9页 |
| 1.1.1 漆酶的分类 | 第7页 |
| 1.1.2 漆酶的催化结构和特征及其催化机制 | 第7-8页 |
| 1.1.3 漆酶的应用 | 第8-9页 |
| 1.2 细菌漆酶Cot A蛋白的研究概况 | 第9-12页 |
| 1.2.1 Cot A蛋白的资源分布及其位置 | 第9-10页 |
| 1.2.2 Cot A蛋白的特性 | 第10页 |
| 1.2.3 Cot A蛋白的氨基酸序列同源性和相似性 | 第10-11页 |
| 1.2.4 Cot A蛋白的空间结构 | 第11-12页 |
| 1.3 Cot A漆酶的分子改造研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.1 理性设计 | 第12页 |
| 1.3.2 半理性设计 | 第12-13页 |
| 1.3.3 定向进化 | 第13页 |
| 1.4 论文的立题依据和主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第13-14页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第15-16页 |
| 2.2.1 仪器 | 第15页 |
| 2.2.2 试剂 | 第15-16页 |
| 2.3 培养基和溶液 | 第16页 |
| 2.4 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.4.1 质粒DNA的提取 | 第16-17页 |
| 2.4.2 突变位点的选择和生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.4.3 突变质粒的构建 | 第17-19页 |
| 2.4.4 DMT感受态和BL21 (DE3)感受态的制备及转化 | 第19-20页 |
| 2.4.5 重组菌培养及Cot A漆酶诱导表达 | 第20页 |
| 2.4.6 野生型及突变体Cot A漆酶的分离纯化 | 第20-21页 |
| 2.4.7 Cot A漆酶的酶活检测 | 第21页 |
| 2.4.8 SDS-PAGE检测 | 第21页 |
| 2.4.9 蛋白质浓度的测定 | 第21页 |
| 2.4.10 野生型和突变体Cot A漆酶的最适反应pH和pH稳定性的测定 | 第21页 |
| 2.4.11 野生型和突变体Cot A漆酶的最适反应温度和温度稳定性的测定 | 第21-22页 |
| 2.4.12 野生型和突变体Cot A漆酶的动力学常数测定 | 第22页 |
| 2.4.13 野生型和突变体Cot A漆酶的染料脱色应用 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-40页 |
| 3.1“底物结合口袋”区域关键氨基酸定点突变提高Cot A漆酶对ABTS的催化效率 | 第23-31页 |
| 3.1.1 突变质粒的设计、构建与转化 | 第23-24页 |
| 3.1.2 突变体的表达 | 第24-25页 |
| 3.1.3 野生型和突变体Cot A漆酶的纯化及其动力学常数 | 第25-27页 |
| 3.1.4 pH对野生型和突变体Cot A漆酶的影响 | 第27-29页 |
| 3.1.5 温度对野生型和突变体Cot A漆酶的影响 | 第29-31页 |
| 3.2 通过PoPMuSiC-2.1 在线设计提高双突变体L386W/G417L的热稳定性 | 第31-34页 |
| 3.3 野生型和突变体Cot A漆酶对底物SGZ和DMP的酶学性质 | 第34-38页 |
| 3.3.1 以SGZ为底物时的酶学性质 | 第34-35页 |
| 3.3.2 以DMP为底物时的酶学性质 | 第35-38页 |
| 3.4 野生型和突变体Cot A漆酶对三种底物的动力学参数分析比较 | 第38页 |
| 3.5 野生型和突变体Cot A漆酶应用于工业合成染料的脱色 | 第38-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-41页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 附录 1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文和专利申请 | 第47-48页 |
| 附录 2：本实验使用的基因序列 | 第48页 |
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