| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 β-丙氨酸 | 第9-12页 |
| 1.1.1 β-丙氨酸简介 | 第9页 |
| 1.1.2 β-丙氨酸的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 β-丙氨酸的合成 | 第10-12页 |
| 1.2 L-天冬氨酸α-脱羧酶 | 第12-14页 |
| 1.2.1 L-天冬氨酸α-脱羧酶简介 | 第12页 |
| 1.2.2 L-天冬氨酸α-脱羧酶催化机理 | 第12-14页 |
| 1.2.3 L-天冬氨酸α-脱羧酶的研究现状 | 第14页 |
| 1.3 本课题的立题和主要研究内容 | 第14-16页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第14-15页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基及相关试剂的配制 | 第18-20页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 基因组DNA和相关质粒的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 天冬氨酸α-脱羧酶基因的克隆 | 第21页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第21页 |
| 2.2.4 目的基因的纯化和pMD18-T的连接 | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组质粒的构建 | 第22页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌感受态的制备及转化 | 第22页 |
| 2.2.7 谷氨酸棒状杆菌感受态的制备及电击转化 | 第22-23页 |
| 2.2.8 重组天冬氨酸α-脱羧酶菌株的诱导表达及细胞破碎 | 第23页 |
| 2.2.9 天冬氨酸α-脱羧酶的纯化及浓度测定 | 第23-24页 |
| 2.2.10 L-天冬氨酸α-脱羧酶酶活的测定 | 第24页 |
| 2.2.11 L-天冬氨酸α-脱羧酶部分酶学性质的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.12 重叠延伸PCR构建L-天冬氨酸α-脱羧酶突变株 | 第25-26页 |
| 2.2.13 突变的L-天冬氨酸α-脱羧酶催化稳定性及自我剪切的测定 | 第26页 |
| 2.2.14 全细胞转化生产β-丙氨酸的条件优化 | 第26页 |
| 2.2.15 重组L-天冬氨酸α-脱羧酶菌株的5L发酵罐培养和全细胞转化.. | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-44页 |
| 3.1 重组菌的克隆及表达 | 第27-30页 |
| 3.1.1 L-天冬氨酸α-脱羧酶基因BsPanD、CgPanD和LpPanD的克隆及分析 | 第27-28页 |
| 3.1.2 大肠杆菌表达菌株的构建及表达 | 第28页 |
| 3.1.3 L-天冬氨酸α-脱羧酶的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 3.1.4 重组E.coliBL21/pET28a-BsPanD菌株产β-丙氨酸的初步验证 | 第29-30页 |
| 3.2 重组酶的纯化及部分酶学性质分析 | 第30-33页 |
| 3.2.1 重组L-天冬氨酸α-脱羧酶的纯化及浓度测定 | 第30-31页 |
| 3.2.2 重组酶的最适反应温度和最适pH测定 | 第31-32页 |
| 3.2.3 重组L-天冬氨酸α-脱羧酶酶温度稳定性测定 | 第32-33页 |
| 3.3 枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶的突变研究 | 第33-40页 |
| 3.3.1 不同来源天L-冬氨酸α-脱羧酶的序列对比及进化树分析 | 第33-35页 |
| 3.3.2 突变点的选择及突变株的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.3 突变株的诱导表达及酶的纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.4 突变株酶活的测定 | 第37页 |
| 3.3.5 突变点对天冬氨酸α-脱羧酶自我剪切的分析 | 第37-38页 |
| 3.3.6 突变株对酶的催化稳定的影响 | 第38-40页 |
| 3.4 重组菌的发酵及全细胞转化 | 第40-44页 |
| 3.4.1 转化温度对产β-丙氨酸的影响 | 第40页 |
| 3.4.2 转化缓冲液的pH对产β-丙氨酸的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.3 底物Asp添加方式对产β-丙氨酸的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.4 重组菌5L罐发酵及全细胞转化 | 第42页 |
| 3.4.5 三种重组菌株产β-丙氨酸能力差异分析 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-45页 |
| 主要结论 | 第44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
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