| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-13页 |
| ·玉米大斑病及其病原学 | 第9页 |
| ·病原真菌的信号转导机制与G 蛋白 | 第9-10页 |
| ·病原真菌的异三聚体G 蛋白 | 第10页 |
| ·真菌GΓ亚基的研究进展 | 第10-12页 |
| ·本试验的研究目的及内容 | 第12-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-30页 |
| ·菌株 | 第13页 |
| ·供试培养基 | 第13页 |
| ·供试药品及主要试剂 | 第13-14页 |
| ·主要仪器和设备 | 第14页 |
| ·玉米大斑病菌G 蛋白Γ亚基编码基因同源片段的克隆 | 第14-18页 |
| ·GENOME WALKING 技术延伸基因及其侧翼序列 | 第18-21页 |
| ·STGΓ-1 基因CDNA 序列的获得 | 第21-22页 |
| ·SOUTHERN 杂交验证STGΓ-1 基因拷贝数 | 第22-24页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·杂交用缓冲液 | 第22-23页 |
| ·探针制备 | 第23页 |
| ·酶切基因组DNA | 第23页 |
| ·转膜 | 第23-24页 |
| ·杂交 | 第24页 |
| ·玉米大斑病菌STGΓ-1 基因RNAI 干扰载体的构建 | 第24-28页 |
| ·构建流程（如图1） | 第24-25页 |
| ·引物的设计 | 第25-26页 |
| ·两个同源片段GγF1 和GγF2 的克隆、回收及测序 | 第26页 |
| ·片段GγF1 和GγF2 的酶切 | 第26页 |
| ·pSilent-1 质粒的提取 | 第26-28页 |
| ·STGΓ-1 基因RNAI 重组载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第28-29页 |
| ·原生质体的制备 | 第28页 |
| ·原生质体的纯化 | 第28页 |
| ·原生质体的转化 | 第28页 |
| ·原生质体的再生 | 第28-29页 |
| ·转化子的筛选 | 第29页 |
| ·RNAi 转化子的PCR 确认 | 第29页 |
| ·玉米大斑病菌STGΓ-1 基因RNAI 转化子的形态特征 | 第29-30页 |
| ·转化菌株菌落形态的观察 | 第29页 |
| ·转化菌株生长速度的测定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-46页 |
| ·G 蛋白Γ亚基编码基因同源片段的克隆 | 第30-32页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·简并引物的设计 | 第30页 |
| ·基因同源片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第31页 |
| ·插入片段的PCR 检测 | 第31页 |
| ·基因片段的测序结果 | 第31-32页 |
| ·G 蛋白γ亚基编码基因的同源性分析 | 第32页 |
| ·STGΓ-1 基因全长的克隆与结构分析 | 第32-35页 |
| ·Stgγ-1 基因片段的5′ Genome walking | 第32-33页 |
| ·5′ Genome walking 产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第33页 |
| ·Stgγ-1 基因片段的3′ Genome walking | 第33页 |
| ·3′ Genome walking 产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第33-35页 |
| ·STGΓ-1 基因及编码产物的生物信息学分析 | 第35-38页 |
| ·Stgγ-1 基因序列分析 | 第35-37页 |
| ·编码产物的结构预测 | 第37-38页 |
| ·SOUTHERN 杂交验证STGΓ-1 基因拷贝数 | 第38-39页 |
| ·探针的制备 | 第38-39页 |
| ·拷贝数分析 | 第39页 |
| ·STGΓ-1 基因沉默载体的构建 | 第39-43页 |
| ·基因沉默载体的构建策略 | 第39-40页 |
| ·Stgγ-1 基因片段的克隆及酶切 | 第40-41页 |
| ·pSilent-1 质粒用于载体构建的双酶切 | 第41-42页 |
| ·Stgγ-1 基因片段的连接与验证 | 第42-43页 |
| ·新构建载体的保存 | 第43页 |
| ·玉米大斑病菌STGΓ-1 基因遗传转化及转化子的筛选 | 第43-46页 |
| ·原生质体的制备与再生验证 | 第43-44页 |
| ·原生质体的转化和转化子的筛选 | 第44页 |
| ·转化子的PCR 初步确认 | 第44页 |
| ·转化子的形态观察 | 第44-45页 |
| ·转化子的生长速度测定 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·GENOME WALKING 技术获得已知基因片段的侧翼序列 | 第46页 |
| ·STGΓ-1 基因结构及其蛋白的功能 | 第46页 |
| ·RNA 干扰技术在基因功能研究中的应用 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
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