摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 文献综述 | 第11-18页 |
1.1 MicroRNA(miRNA)的研究概述 | 第11-14页 |
1.1.1 miRNA的形成 | 第11-12页 |
1.1.2 miRNA的特点 | 第12页 |
1.1.3 植物miRNA的功能 | 第12-14页 |
1.2 miR164的研究概述 | 第14-15页 |
1.2.1 miR164家族成员的概况 | 第14-15页 |
1.2.2 miR164的研究进展 | 第15页 |
1.3 NAC家族的研究概述 | 第15-16页 |
1.3.1 NAC家族的概况和研究进展 | 第15-16页 |
1.4 研究内容、总体研究路线 | 第16-17页 |
1.4.1 研究内容 | 第16-17页 |
1.4.2 总体研究路线 | 第17页 |
1.5 研究目的及意义 | 第17-18页 |
第二章 材料与方法 | 第18-40页 |
2.1 实验材料 | 第18-19页 |
2.1.1 植物材料 | 第18页 |
2.1.2 菌种及载体 | 第18页 |
2.1.3 引物 | 第18页 |
2.1.4 试剂盒及试剂 | 第18页 |
2.1.5 实验仪器 | 第18-19页 |
2.1.6 培养基和抗生素以及各种常用溶液 | 第19页 |
2.1.7 数据库及生物软件 | 第19页 |
2.2 实验方法 | 第19-40页 |
2.2.1 载体构建 | 第19-29页 |
2.2.2 植物转基因构建与鉴定 | 第29-30页 |
2.2.3 番茄植物基因组DNA提取 | 第30页 |
2.2.4 转基因植物的阳性鉴定 | 第30-31页 |
2.2.5 植物总RNA的提取 | 第31-32页 |
2.2.6 反转录 | 第32-34页 |
2.2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第34-35页 |
2.2.8 Northern Blot印迹杂交 | 第35-37页 |
2.2.9 GUS组织化学染色 | 第37-39页 |
2.2.10 转基因表型分析 | 第39-40页 |
第三章 结果与分析 | 第40-63页 |
3.1 Sly-miR164表达模式的分析 | 第40-45页 |
3.1.1 Northern Blot印迹杂交检测 | 第40-41页 |
3.1.2 靶基因的qPCR检测 | 第41-43页 |
3.1.3 GUS转基因植株染色 | 第43-45页 |
3.2 载体构建 | 第45-52页 |
3.2.1 过表达载体构建 | 第45-47页 |
3.2.2 沉默载体构建 | 第47-49页 |
3.2.3 Crispr/cas9敲除载体的构建 | 第49-50页 |
3.2.4 GUS融合载体的构建 | 第50页 |
3.2.5 转基因植株的鉴定 | 第50-52页 |
3.3 Sly-miR164对果实成熟发育时间的影响 | 第52-55页 |
3.4 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164b影响成熟Sly-miR164的积累 | 第55页 |
3.5 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164a/b影响植物的形态 | 第55-56页 |
3.6 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164b导致叶片形态改变 | 第56-57页 |
3.7 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164b改变花器官形态 | 第57-59页 |
3.8 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164a/b改变果实发育 | 第59-61页 |
3.9 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164b改变靶基因表达 | 第61-63页 |
第四章 讨论 | 第63-66页 |
4.1 Sly-miR164及靶基因的时空特异表达模式 | 第63-64页 |
4.2 Sly-miR164影响果实发育和成熟的时间 | 第64页 |
4.3 Crispr/cas9敲除pri-Sly-miR164a/b改变番茄植株的形态 | 第64-66页 |
第五章 结论 | 第66-67页 |
5.1 本文结论 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-71页 |
附录 1 | 第71-73页 |
附录 2 | 第73-74页 |
附录 3 | 第74-77页 |
附录 4 | 第77-78页 |
攻读硕士学位期间的研究成果 | 第78-79页 |
致谢 | 第79页 |