| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的研究进展 | 第13-23页 |
| 1.马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的结构、表达特性 | 第13-14页 |
| 2.马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的防御功能 | 第14-15页 |
| 3.马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的表达调控 | 第15-17页 |
| 4.马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的克隆和转基因研究 | 第17-19页 |
| 参考文献 | 第19-23页 |
| 第二章 水稻抗虫转基因研究进展 | 第23-34页 |
| 1.Bt杀虫晶体蛋白基因 | 第23-25页 |
| 2.蛋白酶抑制剂基因 | 第25-27页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂基因 | 第25-26页 |
| ·Bowman-Birk家族 | 第25-26页 |
| ·Kunitz家族 | 第26页 |
| ·PINⅠ和PINⅡ家族 | 第26页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第26-27页 |
| ·其他蛋白酶抑制剂 | 第27页 |
| 3.外源凝集素基因 | 第27-28页 |
| 4.核糖体失活蛋白基因(RIPs) | 第28页 |
| 5.双价或多价抗虫基因 | 第28-29页 |
| 6.转基因抗虫水稻的问题及发展策略 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第三章 西红柿原系统素的研究进展 | 第34-41页 |
| 1.原系统素的分离、功能域分析 | 第34-35页 |
| 2.原系统素的定位和运输 | 第35页 |
| 3.原系统素基因(prosystemin)的克隆 | 第35-37页 |
| 4.原系统素信号的传导 | 第37-38页 |
| 5.原系统素的其他功能 | 第38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第四章 二倍体马铃薯(Solanum.phurejia)蛋白酶抑制剂Ⅱ基因(PINⅡ-2x)的克隆、序列分析 | 第41-54页 |
| 1.材料与方法 | 第42-46页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·二倍体马铃薯 | 第42页 |
| ·细菌菌株 | 第42页 |
| ·质粒载体 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·各种酶类 | 第42页 |
| ·试剂盒 | 第42页 |
| ·其他试剂 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·马铃薯伤害处理 | 第43页 |
| ·植物RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·PCR扩增产物的克隆和序列分析 | 第44页 |
| ·RT-PCR分析 | 第44-45页 |
| ·RNA电泳及转膜 | 第45页 |
| ·探针标记、杂交及检测 | 第45-46页 |
| 2 结果分析 | 第46-50页 |
| ·cDNA文库的质量分析 | 第46页 |
| ·全长PINⅡ-2x cDNA和DNA的克隆、序列分析 | 第46-48页 |
| ·二倍体马铃薯PINⅡ-2x氨基酸序列分析 | 第48页 |
| ·PINⅡ-2x基因在IVP101叶片中的表达特性 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第五章 马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的植物表达载体构建 | 第54-67页 |
| 1 材料和方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·酶类 | 第55页 |
| ·质粒载体 | 第55页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·抗生素 | 第55页 |
| ·试剂盒 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·大肠肝菌感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
| ·质粒提取 | 第56页 |
| ·酶切产物的回收 | 第56页 |
| ·连接反应与转化 | 第56-57页 |
| ·根癌农杆菌EHA105感受态的制备和转化 | 第57页 |
| 2.结果与分析 | 第57-65页 |
| ·水稻ActⅠ启动子和PINⅡ-2x融合载体的构建 | 第57-58页 |
| ·玉米Ubi启动子和PINⅡ-2x融合载体的构建 | 第58页 |
| ·马铃薯PINⅡ启动子和PINⅡ融合载体的构建 | 第58页 |
| ·双元载体转化农杆菌EHA105 | 第58-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第六章 农杆菌介导转化获得转PINⅡ-2x基因水稻植株 | 第67-85页 |
| 1 材料与方法 | 第68-74页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·水稻品种 | 第68页 |
| ·菌株 | 第68页 |
| ·质粒 | 第68页 |
| ·组培试剂 | 第68页 |
| ·其他试剂 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-74页 |
| ·农杆菌的活化 | 第69页 |
| ·水稻愈伤的转化、抗性愈伤的筛选和植株再生 | 第69-71页 |
| ·水稻基因组DNA的提取 | 第71-72页 |
| ·转基因水稻的PCR检测 | 第72页 |
| ·转基因水稻叶片的潮霉素抗性鉴定 | 第72-73页 |
| ·转基因水稻T0代种子的潮霉素发芽实验 | 第73页 |
| ·转基因水稻的Southern blot鉴定 | 第73页 |
| ·转基因水稻的Northern blot鉴定 | 第73页 |
| ·转基因水稻的抗虫性鉴定 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-80页 |
| ·转基因水稻植株的获得 | 第74页 |
| ·转基因水稻的PCR鉴定 | 第74-76页 |
| ·转基因水稻叶片的潮霉素筛选 | 第76页 |
| ·转基因T0代水稻种子的潮霉素发芽 | 第76-77页 |
| ·转基因水稻的Southern blot | 第77-78页 |
| ·转基因水稻的Northern blot | 第78页 |
| ·转基因水稻的二化螟鉴定 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第七章 西红柿原系统素基因(prosystemin)转化水稻的初步研究 | 第85-99页 |
| 1 材料与方法 | 第86-87页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·水稻品种、菌株、质粒和试剂 | 第86页 |
| ·PCR引物 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-87页 |
| ·载体的构建 | 第86页 |
| ·转基因水稻的获得 | 第86页 |
| ·转基因水稻的PCR检测 | 第86页 |
| ·转基因水稻叶片和种子的潮霉素抗性鉴定 | 第86-87页 |
| ·转基因水稻的Southern blot鉴定 | 第87页 |
| ·转基因水稻的Northern blot鉴定 | 第87页 |
| ·转基因水稻的抗虫性鉴定 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-96页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第87-92页 |
| ·玉米Ubi启动子和西红柿原系统素基因的融合载体的构建 | 第87-90页 |
| ·西红柿原系统素基因和马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因双价载体的构建 | 第90-92页 |
| ·转基因水稻的获得和初步鉴定 | 第92-93页 |
| ·转基因水稻的Southern blot | 第93-94页 |
| ·转基因水稻的Northern blot | 第94-95页 |
| ·转基因水稻的二化螟鉴定 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-99页 |
| 全文结论 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
| 攻读博士期间发表文章 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
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