| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| ·甘草酸及其衍生物的研究应用现状 | 第10-14页 |
| ·甘草酸的性质及其用途 | 第10-11页 |
| ·β-D-单葡萄糖醛酸基甘草次酸的性质及其用途 | 第11-12页 |
| ·甘草次酸的性质及其用途 | 第12页 |
| ·改性甘草酸的方法 | 第12-13页 |
| ·生物催化甘草酸的国内外研究现状 | 第13-14页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的概述 | 第14-17页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的来源及应用 | 第14-15页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的酶活中心 | 第15-16页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的催化机理 | 第16-17页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的常用底物 | 第17页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶基因克隆的研究现状 | 第17-20页 |
| ·高效生物催化剂的筛选方法 | 第17-18页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶基因同源分析 | 第18页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的克隆表达研究现状 | 第18-20页 |
| ·论文研究的目的意义及技术路线 | 第20-21页 |
| ·研究的目的及意义 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·实验试剂 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·菌株复筛方法 | 第24页 |
| ·菌株鉴定方法 | 第24页 |
| ·主要基因操作方法 | 第24-28页 |
| ·代谢产物的鉴定方法 | 第28页 |
| ·粗酶液制备 | 第28页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶活力的测定方法 | 第28-29页 |
| ·真菌菌体生物量的测定 | 第29页 |
| ·细菌及酵母菌体生物量的测定 | 第29页 |
| ·葡萄糖浓度的测定方法 | 第29页 |
| ·pH 值的测定 | 第29-30页 |
| 第三章 产β-D-葡萄糖醛酸苷酶菌株的鉴定及其产酶条件的研究 | 第30-40页 |
| ·产β-D-葡萄糖醛酸苷酶菌株的筛选 | 第30-33页 |
| ·代谢产物的薄层层析（TLC）分析 | 第30-31页 |
| ·代谢产物的LC－MS 分析 | 第31-32页 |
| ·代谢产物流向分析 | 第32-33页 |
| ·菌株的鉴定 | 第33-37页 |
| ·菌落形态特征 | 第33-34页 |
| ·菌体显微特征 | 第34-35页 |
| ·菌体分子生物学特征 | 第35-37页 |
| ·菌株产酶条件的研究 | 第37-39页 |
| ·酶的表达方式 | 第37页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第37-38页 |
| ·培养基初始pH 对产酶的影响 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第四章 三种β-D-葡萄糖醛酸苷酶的催化反应特性研究 | 第40-46页 |
| ·pH 对β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性及稳定性的影响 | 第40-41页 |
| ·温度对β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性及稳定性的影响 | 第41-43页 |
| ·金属离子及抑制剂对β-D-葡萄糖醛酸苷酶活力的影响 | 第43-44页 |
| ·三株菌β-D-葡萄糖醛酸苷酶的动力学常数（Km 和Vmax）的测定 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第五章 Penicillium purpurogenum Li-3 的诱导产酶研究 | 第46-52页 |
| ·葡萄糖对β-D-葡萄糖醛酸苷酶表达的影响 | 第46-48页 |
| ·碳代谢阻遏现象的表现 | 第46-47页 |
| ·两种碳源中菌体生物量的差异 | 第47页 |
| ·两种碳源中菌体生长与产酶关系 | 第47-48页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶诱导表达研究 | 第48-51页 |
| ·诱导方法的建立 | 第48-49页 |
| ·不同浓度葡萄糖对菌体生物量的影响 | 第49页 |
| ·不同浓度葡萄糖对诱导产酶的影响 | 第49-50页 |
| ·不同浓度葡萄糖对GAMG 产量的影响 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第六章 β-D-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与表达 | 第52-65页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆、鉴定和序列分析 | 第52-58页 |
| ·简并引物设计 | 第52-54页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶部分基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶全长基因Pgus 的扩增 | 第55-56页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶Pgus 基因的克隆与测序 | 第56-58页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶原核表达体系的构建 | 第58-61页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶原核表达质粒pET-28a(+)-Pgus 的构建 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Pgus 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第60-61页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶真核表达体系的构建 | 第61-64页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶真核表达质粒pPIC9K-Pgus 的构建 | 第61-63页 |
| ·重组毕赤酵母Pgus 基因表达体系的构建 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第七章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简历 | 第75-76页 |
| 导师评阅表 | 第76页 |
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