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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--超嗜热菌亮氨酰-tRNA合成酶的高表达和一步纯化氨基酰-tRNA合成酶复合物结构和功能的研究
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超嗜热菌亮氨酰-tRNA合成酶的高表达和一步纯化氨基酰-tRNA合成酶复合物结构和功能的研究
 
     论文目录
 
摘要:第1-4页
ABSTRACT:第4-11页
第一部分 超嗜热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶的高表达和纯化第11-24页
 摘要第11页
 关键词第11页
 1. 引言第11-14页
 2. 材料和方法第14-18页
     ·试剂,菌株和质粒第14页
     ·质粒pSBETH6-lrsa 和pET-15B-lrsb 的构建第14-16页
     ·His6-αβ-LeuRS 基因的表达第16页
     ·His6-αβ-LeuRS 的纯化第16-17页
     ·酶活性和动力学常数的测定第17-18页
 3. 结果和讨论第18-21页
   ·得到重组质粒pSBETH6-lrsa 和pET-15b-lrsb第18页
     ·His6-αβ-LeuRS 的基因表达和蛋白质纯化第18-20页
     ·His6-αβ-LeuRS 的氨基酰化活力和动力学常数第20-21页
 4. 参考文献第21-24页
第二部分 氨基酰-tRNA 合成酶复合物结构和功能的研究第24-94页
 第一章 复合物中亮氨酰-tRNA 合成酶的 C-末端延伸肽段与精氨酰-tRNA 合成酶相互作用第24-66页
  摘要第24页
  关键词第24-25页
  1. 引言第25-28页
  2. 材料和方法第28-42页
     ·试剂,质粒,菌株和细胞株第28-30页
     ·ΔChcLeuRS 的基因克隆,表达和蛋白质纯化第30-31页
     ·从小牛肝tRNA 中分离tRNA~(Leu)第31-32页
     ·人胞质tRNALeu(AAG)和tRNAArg(ACG)的体外转录第32-36页
     ·酶活力和动力学常数的测定第36-37页
     ·hcLeuRS 的自身免疫原活性的检测第37-38页
     ·hcLeuRS 和?ChcLeuRS 的热稳定性测定第38页
     ·共聚焦显微镜(confocal fluorescence microscopy)观测hcLeuRS, ΔChcLeuRS, hcArgRS 和ΔNhcArgRS 在293T 细胞中的定位第38-39页
     ·免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)实验所需的质粒构建和抗体制备第39-40页
     ·细胞培养,DNA 转染和免疫共沉淀(IP)实验第40页
     ·Western 印迹实验(Western blot,WB)第40-41页
     ·GST pull-down 实验第41-42页
  3. 实验结果第42-53页
   ·ΔChcLeuRS 的基因表达和蛋白质的纯化第42-43页
   ·小牛肝tRNA 的分级和人胞质tRNA~(Leu)(AAG)和tRNA~(Arg)(ACG)的体外转录第43-45页
   ·ΔChcLeuRS 的活力和动力学常数第45页
   ·血清中和实验第45页
     ·hcLeuRS 和ΔChcLeuRS 具有相似的热稳定性第45-46页
     ·293T 细胞中,hcLeuRS, ΔChcLeuRS, hcArgRS 和ΔNhcArgRS的亚细胞定位第46-48页
     ·hcArgRS 和ΔNhcArgRS 的动力学常数第48-49页
     ·hcLeuRS 的C-末端延伸肽段和hcArgRS 的N-末端延伸肽段相互作用第49-53页
  4. 讨论第53-58页
  5. 参考文献第58-66页
 第二章 氨基酰-tRNA 合成酶复合物中辅助因子对氨基酰-tRNA 合成酶具有活力促进作用第66-94页
  摘要第66页
  关键词第66页
  1. 引言第66-69页
  2. 材料和方法第69-74页
     ·试剂,质粒和菌株第69-70页
     ·基因克隆第70页
     ·基因表达第70-71页
     ·GST 融合蛋白质和Hi56 融合蛋白质纯化第71-72页
     ·三种因子对aaRS 的氨基酰化活力影响的测定第72-74页
     ·三种因子对aaRS 的氨基酰化时间曲线影响的测定第74页
  3. 实验结果第74-82页
     ·GST 融合蛋白质的纯化和剪切第74页
     ·His6 融合蛋白质纯化第74-75页
     ·p43,p38 和p18 对aaRS 氨基酰化活力和时间曲线的影响第75-79页
     ·p43,p38 和p18 对不同种属的LeuRS 的氨基酰化活力和时间曲线的影响第79-82页
  4. 讨论第82-86页
  5. 参考文献第86-94页
结论第94-97页
附录:本论文缩写汇编第97-101页
在学期间发表的论文第101-103页
致谢第103-104页

 
 
论文编号BS1155103,这篇论文共104
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