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冠状病毒甲基转移酶抑制剂筛选平台及其反向遗传学系统的建立
 
     论文目录
 
本论文的创新点第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
引言第13-15页
第一部分 概述冠状病毒及其反向遗传学系统和加帽修饰第15-56页
 1 冠状病毒第15-40页
   ·冠状病毒造成的疾病第15-17页
     ·人冠状病毒第15-16页
     ·鼠冠状病毒第16-17页
   ·冠状病毒第17-29页
     ·冠状病毒的分类第17-18页
     ·冠状病毒基因组及病毒粒子第18-19页
     ·冠状病毒的生活周期第19-20页
     ·冠状病毒的复制第20-22页
     ·病毒蛋白第22-29页
   ·冠状病毒的反向遗传学第29-34页
     ·定向重组第30-31页
     ·从cDNA中重新形成病毒的反向遗传学系统第31-34页
   ·冠状病毒与先天免疫逃逸第34-37页
     ·宿主抗病毒先天免疫及对SARS-CoV感染的反应第35-36页
     ·SARS-CoV通过DMVs保护及加帽修饰逃逸宿主先天免疫的识别第36-37页
   ·抗冠状病毒药物研究进展第37-40页
     ·抗冠状病毒药物第37-39页
     ·冠状病毒疫苗第39-40页
 2 mRNA加帽机制及其功能酶研究概要第40-56页
   ·5’末端帽子的结构、功能及加帽过程第40-42页
   ·加帽修饰相关功能酶简介第42-45页
     ·RNA三磷酸酶的结构与作用机制第42-43页
     ·鸟苷酸转移酶的结构与作用机制第43-44页
     ·甲基转移酶的结构和作用机制第44-45页
   ·生物体内参与加帽过程的酶组成第45-46页
   ·病毒的加帽机制第46-50页
     ·病毒传统的加帽修饰方式第47-48页
     ·病毒非传统的加帽方式第48-50页
   ·病毒加帽修饰与先天免疫第50-52页
   ·针对加帽酶的抑制剂第52-54页
     ·三磷酸酶抑制剂第52页
     ·鸟苷酸转移酶抑制剂第52-53页
     ·甲基化转移酶抑制剂第53-54页
   ·甲基供体SAM的基本特性第54-56页
第二部分 冠状病毒甲基转移酶抑制剂的筛选第56-88页
 3 酵母菌功能性互补及酵母生长抑制系统的构建_筛选冠状病毒甲基转移酶抑制剂第56-88页
   ·研究背景概述第56-58页
   ·实验材料第58-62页
     ·实验仪器第58-59页
     ·菌种及质粒第59页
     ·工具酶、试剂盒及试剂第59-61页
     ·相关溶液第61-62页
   ·实验方法、原理第62-78页
     ·引物设计第63-64页
     ·酵母菌表达质粒及原核表达质粒的构建第64-65页
     ·DNA目的片段扩增及质粒DNA的实验操作第65-71页
     ·酵母表达质粒的转化第71-72页
     ·转化酵母菌在5-FOA上的筛选第72-73页
     ·冠状病毒nsp14的体外表达、纯化、活性测试及药物抑制第73-78页
   ·实验结果及讨论部分第78-88页
     ·所有冠状病毒nsp14都能互补酵母N7-MTase的功能第78-79页
     ·对数生长期内吸光值法能准确反映酵母细胞的数目第79-81页
     ·体外生化检测药物对冠状病毒N7-MTase活性的影响第81-82页
     ·以酵母遗传学为基础冠状病毒N7-MTase抑制剂筛选平台的建立第82-84页
     ·检测酵母遗传学为基础的筛选平台的有效性第84-85页
     ·蹄选抑制冠状病毒N7-MTase的天然化合物药库第85-86页
     ·优化冠状病毒N7-MTase抑制剂的筛选体系第86-88页
第三部分 鼠肝炎冠状病毒反向遗传学系统的建立第88-126页
 4 重组突变鼠肝炎冠状病毒的构建第88-123页
   ·研究背景概述第88-90页
   ·实验材料第90-93页
     ·实验仪器第90页
     ·病毒、菌种及质粒第90-91页
     ·实验用耗材第91-93页
   ·实验方法及原理第93-109页
     ·引物设计第93-94页
     ·以痘苗病毒为载体的全长MHV重组病毒(V.V-inf-1)的扩增及噬斑分析第94-95页
     ·pGPT-out-nsp14同源重组质粒的构建第95-96页
     ·痘苗病毒介导的同源重组第96-97页
     ·GPT双向筛选第97-100页
     ·重组痘苗病毒DNA的提取及PCR鉴定第100-102页
     ·GPT-Out重组痘苗病毒DNA的提取、酶切与体外转录第102-105页
     ·突变MHV基因组全长RNA的转染及拯救第105-106页
     ·MHV突变体的纯化与鉴定第106-108页
     ·MHV突变体生长曲线的测定第108-109页
   ·实验结果及讨论第109-123页
     ·重组痘苗病毒V.V-MHV-A59 nsp14-gpt in的增殖及滴度测定第109-110页
     ·鼠肝炎冠状病毒基因组DNA的定向突变第110-115页
     ·MHV突变体的拯救第115-119页
     ·MHV-nsp14-mutants的增殖、噬斑分析及温度敏感性测试第119-121页
     ·MHV-nsp14-mutants生长曲线的测定第121-123页
 5 讨论与展望第123-126页
参考文献第126-136页
研究生期间发表论文第136-137页
致谢第137-138页

 
 
论文编号BS2247003,这篇论文共138
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