| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·氨基酸脱氢酶 | 第9-10页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的分布 | 第10页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的功能 | 第10-11页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的性质 | 第11-12页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的表达和诱导 | 第11页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的底物结合特异性 | 第11-12页 |
| ·丙氨酸脱氢酶稳定性 | 第12页 |
| ·蛋白质晶体学在丙氨酸脱氢酶研究上的应用 | 第12-15页 |
| ·蛋白质晶体学技术流程 | 第12页 |
| ·蛋白质的表达与纯化 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的结晶 | 第13页 |
| ·衍射数据的收集与处理 | 第13-14页 |
| ·相位的确定 | 第14页 |
| ·模型的建立及修正 | 第14-15页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的空间结构研究现状 | 第15-19页 |
| ·不同来源的丙氨酸脱氢酶的序列比较 | 第15-17页 |
| ·丙酮酸结合位点 | 第17页 |
| ·NAD~+的结合位点 | 第17-18页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的作用机理 | 第18-19页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的研究意义和内容 | 第19-21页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的研究意义 | 第19-20页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的研究内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-43页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·质粒、菌株、基因 | 第21页 |
| ·主要实验仪器 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·常用培养基和缓冲液的配制 | 第22-24页 |
| ·实验方法 | 第24-43页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald重组质粒的构建及鉴定 | 第24-30页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的表达与纯化 | 第30-33页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的结晶 | 第33-39页 |
| ·晶体衍射数据的收集和分析 | 第39-40页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A重组质粒的获得 | 第40-43页 |
| 3 结果 | 第43-64页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的克隆,表达纯化及结晶 | 第43-56页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald重组质粒的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的表达与纯化 | 第45-49页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的结晶条件的筛选和优化 | 第49-54页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald的数据收集 | 第54-56页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A的克隆,表达和结晶 | 第56-63页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列分析 | 第56-57页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A的表达 | 第58-59页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A的Ni-NTA亲和层析 | 第59页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A的阴离子交换层析 | 第59-60页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A结晶条件的筛选和优化 | 第60-62页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald K73A的数据收集 | 第62-63页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald及其突变体Ald K73A的晶体结构的初步分析 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 7 攻读学位期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73-74页 |
| 主要符号说明 | 第74页 |
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