摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
第一章 文献综述 | 第14-22页 |
1.1 PGC7 的生物学功能及研究进展 | 第14-19页 |
1.1.1 PGC7 的生物学特征 | 第14页 |
1.1.2 PGC7 在早期胚胎发育中的作用 | 第14-15页 |
1.1.3 PGC7在DNA甲基化调控中的作用 | 第15-17页 |
1.1.4 PGC7 在染色质调控中的作用 | 第17-18页 |
1.1.5 PGC7 在多能性中的作用 | 第18-19页 |
1.2 STAT家族蛋白研究进展 | 第19-22页 |
1.2.1 STAT家族蛋白概述 | 第19-20页 |
1.2.2 STAT家族蛋白在调控细胞多能性中的作用 | 第20-22页 |
第二章 PGC7与STAT1 互作验证及对STAT1 细胞定位的影响 | 第22-44页 |
2.1 材料与方法 | 第22-35页 |
2.1.1 材料 | 第22页 |
2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
2.1.3 仪器与耗材 | 第23-24页 |
2.1.4 主要溶液配制 | 第24页 |
2.1.5 细胞培养与传代 | 第24-25页 |
2.1.6 总RNA提取与反转录 | 第25-26页 |
2.1.7 STAT1 标签表达载体构建载体构建 | 第26-32页 |
2.1.8 细胞转染 | 第32页 |
2.1.9 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第32-34页 |
2.1.10 蛋白质免疫共沉淀(Co-iP) | 第34-35页 |
2.1.11 免疫荧光染色 | 第35页 |
2.2 结果 | 第35-42页 |
2.2.1 STAT1 真核表达载体构建 | 第35-36页 |
2.2.2 PGC7与STAT1 的互作验证 | 第36-37页 |
2.2.3 STAT1 结构域分析 | 第37页 |
2.2.4 STAT1 及其截短体真核表达载体构建 | 第37-38页 |
2.2.5 PGC7与STAT1 互作结构域分析 | 第38-39页 |
2.2.6 PGC7与STAT1 的细胞内共定位 | 第39-40页 |
2.2.7 PGC7与STAT1 截短体的细胞内共定位 | 第40-42页 |
2.2.8 PGC7对STAT1 的磷酸化水平的影响 | 第42页 |
2.3 讨论 | 第42-43页 |
2.4 小结 | 第43-44页 |
第三章 PGC7 激活STAT1 的活性 | 第44-53页 |
3.1 材料与方法 | 第44-47页 |
3.1.1 材料 | 第44页 |
3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
3.1.3 仪器与耗材 | 第44页 |
3.1.4 主要溶液配制 | 第44页 |
3.1.5 细胞培养与传代 | 第44页 |
3.1.6 总RNA提取与反转录 | 第44页 |
3.1.7 PTPN6a表达载体构建 | 第44-46页 |
3.1.8 细胞转染 | 第46页 |
3.1.9 蛋白质免疫共沉淀(Co-Ip) | 第46页 |
3.1.10 双荧光素酶报告实验 | 第46-47页 |
3.2 结果 | 第47-51页 |
3.2.1 PTPN6a真核表达载体构建 | 第47-48页 |
3.2.2 磷酸化修饰蛋白的免疫印迹法(Phosphorylated Western Blot) | 第48-49页 |
3.2.3 蛋白质免疫共沉淀检测PGC7 对于PTPN6a与 STAT1 的互作影响 | 第49-50页 |
3.2.4 双荧光素酶报告实验检测ISRE报告载体活性 | 第50-51页 |
3.3 讨论 | 第51-52页 |
3.4 小结 | 第52-53页 |
第四章 PGC7与STAT1 的互作参与胚胎干细胞多能性维持 | 第53-59页 |
4.1 材料与方法 | 第53-54页 |
4.1.1 材料 | 第53页 |
4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
4.1.3 仪器与耗材 | 第53页 |
4.1.4 主要溶液配制 | 第53页 |
4.1.5 细胞培养与传代 | 第53页 |
4.1.6 双荧光素酶报告实验 | 第53-54页 |
4.1.8 SYBR实时荧光定量 | 第54页 |
4.1.9 AP染色(Alkaline phosphatase staining) | 第54页 |
4.2 结果 | 第54-57页 |
4.2.1 PGC7与STAT1 对于Nanog启动子活性的影响 | 第54-55页 |
4.2.2 PGC7与STAT1 对于Nanog和 OCT4 基因表达水平的影响 | 第55-56页 |
4.2.3 PGC7与STAT1 对于F9 细胞整体多能性水平的影响 | 第56-57页 |
4.3 讨论 | 第57-58页 |
4.4 小结 | 第58-59页 |
第五章 结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
个人简历 | 第67页 |