摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
1 引言 | 第11-29页 |
1.1 肺癌 | 第11-17页 |
1.1.1 肺癌的概述 | 第11-13页 |
1.1.2 全球范围内肺癌现状 | 第13-15页 |
1.1.3 肺癌致病因素 | 第15-16页 |
1.1.4 肺癌治疗方法 | 第16-17页 |
1.2 顺铂及其耐药性 | 第17-21页 |
1.2.1 化疗药物—顺铂 | 第17-18页 |
1.2.2 顺铂抗肿瘤作用机制 | 第18-19页 |
1.2.3 顺铂耐药性研究 | 第19-21页 |
1.3 肿瘤微环境 | 第21-25页 |
1.3.1 肿瘤微环境概述 | 第21-22页 |
1.3.2 基质成纤维细胞的功能 | 第22-24页 |
1.3.3 肿瘤微环境与耐药性 | 第24-25页 |
1.4 MDM2基因研究现状 | 第25-28页 |
1.4.1 MDM2基因的结构 | 第25-26页 |
1.4.2 MDM2基因的功能 | 第26-28页 |
1.5 本课题研究目的及意义 | 第28-29页 |
2 实验材料与实验方法 | 第29-42页 |
2.1 实验材料 | 第29-34页 |
2.1.1 细胞珠 | 第29页 |
2.1.2 质粒与载体 | 第29页 |
2.1.3 实验试剂与耗材 | 第29-32页 |
2.1.4 实验仪器与设备 | 第32页 |
2.1.5 主要试剂的配制 | 第32-34页 |
2.2 实验方法 | 第34-42页 |
2.2.1 细胞培养与细胞传代 | 第34页 |
2.2.2 细胞增殖检测 | 第34页 |
2.2.3 细胞活力检测—台盼蓝拒染法 | 第34-35页 |
2.2.4 平板克隆形成实验 | 第35页 |
2.2.5 软琼脂克隆形成实验 | 第35页 |
2.2.6 Western Blot蛋白免疫印迹实验 | 第35-37页 |
2.2.7 细胞划痕愈合实验 | 第37页 |
2.2.8 Transwell细胞迁移实验 | 第37页 |
2.2.9 条件培养基(Conditioned Medium,CM)的制备 | 第37-38页 |
2.2.10 胶原凝胶收缩实验 | 第38页 |
2.2.11 流式细胞仪检测细胞周期—PI单染法 | 第38页 |
2.2.12 流式细胞仪检测细胞凋亡—AnnexinV-PI双染法 | 第38页 |
2.2.13 流式细胞仪检测细胞内ROS水平—DCFH-DA染色法 | 第38-39页 |
2.2.14 pHAGE-CMV-MCS-MDM2 重组质粒的构建 | 第39-40页 |
2.2.15 慢病毒包装 | 第40页 |
2.2.16 稳定细胞系的构建实验 | 第40页 |
2.2.17 基因表达数据库分析 | 第40页 |
2.2.18 统计学分析 | 第40-42页 |
3 实验结果 | 第42-68页 |
3.1 MDM2基因在肺癌基质中的表达情况 | 第42-44页 |
3.1.1 MDM2基因肺癌组织中的表达及与病人生存期相关性 | 第42-43页 |
3.1.2 MDM2基因在肺癌基质中的表达 | 第43-44页 |
3.2 过表达MDM2不改变成纤维细胞系表型 | 第44-47页 |
3.2.1 过表达MDM2基因不激活成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化 | 第44-45页 |
3.2.2 过表达MDM2基因不改变成纤维细胞增殖、细胞迁移能力 | 第45-47页 |
3.3 研究模式 | 第47-48页 |
3.4 成纤维细胞过表达MDM2对肺癌细胞增殖影响 | 第48-50页 |
3.4.1 成纤维细胞过表达MDM2促进肺癌细胞增殖 | 第48-50页 |
3.5 成纤维细胞过表达MDM2对肺癌细胞迁移及侵袭的影响 | 第50-52页 |
3.5.1 成纤维细胞过表达MDM2不改变肺癌细胞迁移侵袭能力 | 第50-52页 |
3.6 成纤维细胞过表达MDM2对肺癌细胞耐药性的影响 | 第52-55页 |
3.6.1 成纤维细胞过表达MDM2抑制肺癌细胞在顺铂作用下的死亡 | 第52-54页 |
3.6.2 成纤维细胞过表达MDM2抑制肺癌细胞在顺铂作用下的凋亡 | 第54-55页 |
3.7 成纤维细胞过表达MDM2 促进肺癌细胞对顺铂耐受与ROS无关 | 第55-57页 |
3.7.1 成纤维细胞过表达MDM2 促进肺癌细胞在顺铂作用下ROS的激活 | 第55-56页 |
3.7.2 清除ROS不能拯救肺癌细胞死亡 | 第56-57页 |
3.8 Mcl-1 参与成纤维细胞过表达MDM2 影响肺癌细胞耐药过程 | 第57-60页 |
3.8.1 成纤维细胞过表达MDM2 促进肺癌细胞中抗凋亡蛋白Mcl-1 表达 | 第57-58页 |
3.8.2 外源过表达Mcl-1拯救肺癌细胞在顺铂作用下的细胞凋亡 | 第58-60页 |
3.9 c-Myc参与成纤维细胞过表达MDM2 影响肺癌细胞耐药过程 | 第60-67页 |
3.9.1 成纤维细胞过表达MDM2 下调肺癌细胞中转录因子c-Myc的表达 | 第60-61页 |
3.9.2 外源过表达c-Myc促进肺癌细胞在顺铂作用下的凋亡 | 第61-63页 |
3.9.3 敲低c-Myc的表达抑制肺癌细胞在顺铂作用下的凋亡 | 第63-67页 |
3.10 基质成纤维细胞过表达MDM2对肺癌细胞增殖及药物抗性影响模式图 | 第67-68页 |
4 研究讨论与展望 | 第68-71页 |
4.1 研究讨论 | 第68-70页 |
4.2 研究展望 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-77页 |
缩略词表 | 第77-78页 |
硕士期间发表论文及待发表论文 | 第78-79页 |
致谢 | 第79-80页 |