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高效液相色谱法测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量研究

【制药专业毕业论文】【关键词】 白癜风颗粒;补骨脂素;异补骨脂素;色谱法,高压液相白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等15味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑,驱风止痒之功效,在本院皮肤科应用多年,证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量,保证临床用药效果,本实验建立了HPLC测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高,回收率和精密度好,结果满意。
1 仪器与试剂
Waters600高效液相色谱仪,Waters 2487紫外、可见波长检测器;Breeze色谱工作站;十万分之一微量分析天平;补骨脂素对照品(110730-200309)和异补骨脂素对照品(0738-200108)购自中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯,白癜风颗粒由本院自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1] 色谱柱,ReliaSil.C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(47∶53);流速,1.0 mL/min;检测波长,245 nm;柱温:室温。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品10.42 mg,异补骨脂素10.92 mg,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1.5 mL,置100 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂,按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察:精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液2、4、6、8、10 μL,分别注入液相色谱仪,测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得回归方程:Y=1.25×103+7.55×106X,r=0.999 7。
结果表明,补骨脂素在0.031 264~0.156 30 μg有良好的线性关系,异补骨脂素在0.032 76~0.163 80 μg具有良好的线性关系。
2.5 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液(批号:050502)5 μL,重复进样6次,分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数,结果其RSD分别为0.76%和1.29%。
2.6 稳定性试验 精密吸取对照品溶液5 μL,分别于0,2,4,24,36 h测定峰面积,计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1.99%和1.62%,表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在36 h稳定。
2.7 重现性实验 取样品,精密称定5份,制备供试品溶液,进样测定计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数,其RSD为0.59%。
〖JP2]2.8 回收率实验 采用加样回收法。取批号为050501的样品5份,每份0.25 g,置具塞锥形瓶中,各精密加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品0.14 mg,制备供试品溶液,进样,测定。结果补骨脂素和异补骨脂素平均加样回收率为99.04%,RSD为1.50%。
2.9 样品测定 取3批白癜风颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μg,进样,测定,结果见表1。根据结果,暂定本品以干燥品计,含补骨脂素和异补骨脂素总含量不得少于0.22 mg/g。表1 白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的测定结果
3 小结
  流动相的确定 本实验曾选择乙醇—水溶液系统,结果不太理想,补骨脂素和异补骨脂素的出峰区间有干扰,峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇—水系统,补骨脂素和异补骨脂素的峰形得到明显的改善,且干扰减少。
【参考文献】
[1]宋炳生,李汉保,施惠熏.双黄生血冲剂中补骨脂素的含量测定[J].中草药,2000,31(2):28.
 
 
 
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