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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--牛布鲁氏菌VirB12的分泌表达及间接ELISA检测方法的建立
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牛布鲁氏菌VirB12的分泌表达及间接ELISA检测方法的建立
 
     论文目录
 
摘要第10-12页
Abstract第12-13页
第一章 文献综述第14-22页
    1.1 概述第14-15页
    1.2 病原学第15-16页
    1.3 流行病学第16-17页
    1.4 致病机理第17-18页
    1.5 临床症状及病理变化第18-19页
    1.6 防控措施第19-20页
        1.6.1 监测和净化第19页
        1.6.2 免疫接种第19-20页
    1.7 诊断方法第20-21页
        1.7.1 细菌学检查第20页
        1.7.2 血清学检查第20-21页
        1.7.3 变态反应检查第21页
        1.7.4 分子生物学技术第21页
    1.8 本研究的目的与意义第21-22页
第二章 布鲁氏菌VirB12基因的分泌表达及鉴定第22-30页
    2.1 材料第22-23页
        2.1.1 布鲁氏菌菌株和血清第22页
        2.1.2 载体及菌株第22页
        2.1.3 主要药品及试剂第22页
        2.1.4 主要试剂配方第22-23页
        2.1.5 主要实验仪器第23页
    2.2 方法第23-25页
        2.2.1 引物的设计与合成第23页
        2.2.2 VirB12 基因的PCR扩增及回收第23-24页
        2.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定第24页
        2.2.4 重组阳性菌的诱导表达第24页
        2.2.5 重组蛋白的鉴定第24-25页
    2.3 结果第25-28页
        2.3.1 VirB12基因的扩增第25-26页
        2.3.2 重组表达质粒鉴定第26-27页
        2.3.3 VirB12蛋白的诱导表达第27页
        2.3.4 VirB12蛋白的鉴定第27-28页
    2.4 讨论第28-29页
    2.5 小结第29-30页
第三章 布鲁氏菌VirB12 蛋白纯化及其抗体ELISA方法的初步建立第30-43页
    3.1 材料第30-32页
        3.1.1 临床血清样品第30页
        3.1.2 主要试剂第30-31页
        3.1.3 主要试剂配方第31-32页
    3.2 方法第32-34页
        3.2.1 重组阳性菌的大量诱导表达第32页
        3.2.2 VirB12蛋白亲和纯化第32页
        3.2.3 VirB12重组蛋白的离子交换纯化第32页
        3.2.4 VirB12 重组蛋白的离子交换纯化样品的Western-blot鉴定第32-33页
        3.2.5 ELISA方法的建立第33-34页
    3.3 结果与分析第34-41页
        3.3.1 诱导表达蛋白的SDS-PAGE鉴定第34-35页
        3.3.2 VirB12蛋白的亲和纯化第35页
        3.3.3 VirB12重组蛋白的离子交换纯化第35页
        3.3.4 纯化VirB12蛋白的鉴定第35-36页
        3.3.5 酶标反应板均一性的测定第36-37页
        3.3.6 VirB12蛋白最适包被浓度的确定第37-38页
        3.3.7 封闭液的选择第38页
        3.3.8 阴阳性血清和酶标抗体最适工作浓度的确定第38-39页
        3.3.9 阴阳性血清临界值的确定第39-40页
        3.3.10 临床样品的检测第40-41页
    3.4 讨论第41-42页
    3.5 小结第42-43页
第四章 布鲁氏菌VirB12 抗原多肽的生物素-亲和素ELISA检测方法的初步建立第43-56页
    4.1 材料第43-44页
        4.1.1 临床血清样品第43页
        4.1.2 抗体及试剂第43-44页
        4.1.3 ELISA试剂和溶液第44页
    4.2 实验方法第44-46页
        4.2.1 合成抗原多肽信息表第44页
        4.2.2 抗原反应性初筛dot-bloting检测第44页
        4.2.3 ELISA方法的建立第44-46页
    4.3 实验结果第46-54页
        4.3.1 合成抗原多肽信息表第46页
        4.3.2 抗原反应性初筛dot-bloting检测第46-47页
        4.3.3 多肽的筛选第47-48页
        4.3.4 07B多肽最佳包被浓度的确定第48-49页
        4.3.5 07B多肽封闭液的选择第49-50页
        4.3.6 07B多肽阴性和阳性血清最佳稀释浓度的确定第50-51页
        4.3.7 07B多肽酶标二抗最佳稀释浓度的确定第51-52页
        4.3.8 阴性和阳性血清临界值的确定第52-53页
        4.3.9 临床样品的初步评价第53-54页
    4.4 讨论第54页
    4.5 小结第54-56页
结论第56-57页
参考文献第57-63页
致谢第63-64页
攻读学位期间文章发表情况第64-65页

 
 
论文编号BS726553,这篇论文共65
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