| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·木聚糖及降解酶系 | 第14-16页 |
| ·木聚糖 | 第14-15页 |
| ·木聚糖降解酶系 | 第15页 |
| ·木聚糖降解相关酶促进底物降解的研究概况 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶的研究现状 | 第16-19页 |
| ·木聚糖酶的研究概况 | 第16-17页 |
| ·木聚糖酶的结构及催化机制 | 第17-18页 |
| ·双功能木聚糖酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶的研究现状 | 第19-21页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶的概述 | 第19-20页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶的家族 | 第20页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶的性质 | 第20-21页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶的应用 | 第21页 |
| ·酶分子体外进化方法 | 第21-24页 |
| ·定点突变 | 第21-22页 |
| ·易错 PCR | 第22页 |
| ·DNA shuffling | 第22-23页 |
| ·SCHEMA 模块重组 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 单催化域双功能木聚糖酶分子催化机理的初步研究 | 第25-44页 |
| ·本章引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株、质粒 | 第25页 |
| ·仪器、试剂盒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·引物合成、测序 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·单功能木聚糖酶材料的搜索 | 第26页 |
| ·SCHEMA 方法预测 XynBE18、XynE2 肽段的分割点 | 第26页 |
| ·pET28a-xynBE18、pET22b-xynE2 质粒提取 | 第26-27页 |
| ·正突变体蛋白的获得 | 第27-30页 |
| ·负突变体纯蛋白的获得 | 第30-31页 |
| ·蛋白浓度标准曲线的制定 | 第31-32页 |
| ·各突变体底物特异性的测定 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-41页 |
| ·单功能木聚糖酶材料的搜索 | 第32-35页 |
| ·SCHEMA 方法预测 XynBE18、XynE2 肽段的分割点 | 第35页 |
| ·正突变体的扩增与重组 | 第35-36页 |
| ·正突变体蛋白的序列分析 | 第36-37页 |
| ·三个正突变体蛋白的表达、纯化 | 第37页 |
| ·三个正突变体蛋白的底物特异性测定 | 第37-38页 |
| ·E2-3 再细分的两个突变体 E2-3A、E2-3B 的扩增、重组 | 第38-39页 |
| ·E2-3A,E2-3B 的表达与纯化 | 第39页 |
| ·负突变体蛋白的序列分析 | 第39-41页 |
| ·负突变体蛋白的表达与纯化 | 第41页 |
| ·所有突变体的底物特异性比较 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·后续工作 | 第42-43页 |
| 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 Paenibacillus sp. E18 木聚糖降解酶系的基因克隆、表达与协同作用 | 第44-68页 |
| ·本章引言 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·菌株、质粒 | 第44页 |
| ·仪器、试剂 | 第44-45页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第45页 |
| ·底物配制 | 第45页 |
| ·引物合成、测序 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-55页 |
| ·木聚糖酶系基因簇上游序列的基因克隆 | 第46-48页 |
| ·两个阿拉伯呋喃糖苷酶 Abf43A 和 Abf43B 的异源表达、纯化 | 第48-52页 |
| ·两个阿拉伯呋喃糖苷酶的性质测定 | 第52-54页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶与木聚糖酶的协同作用 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-66页 |
| ·基因簇上游基因的克隆 | 第55-57页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶 Abf43B 的序列分析 | 第57-58页 |
| ·对硝基酚标准曲线的制定 | 第58页 |
| ·阿拉伯糖标准曲线的制定 | 第58-59页 |
| ·pET28a(+)-abf43A 与 pET28a(+)-abf43B 的质粒构建 | 第59页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶 Abf43A 与 Abf43B 的异源表达 | 第59-60页 |
| ·pH 和温度对 Abf43A 和 Abf43B 酶活性的影响 | 第60-61页 |
| ·Abf43A 和 Abf43B 的底物特异性及比活力 | 第61-62页 |
| ·动力学常数的测定 | 第62页 |
| ·阿拉伯呋喃糖苷酶与木聚糖酶的协同作用 | 第62-64页 |
| ·协同作用生成寡糖的 HPLC 分析 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
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