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A型肉毒毒素重组抗原的克隆表达及其ELISA检测试剂盒的制备 |
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论文目录 |
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前言 | 第1-17页 | 1 研究目的和意义 | 第11页 | 2 肉毒毒素研究进展 | 第11-17页 | ·毒素的来源和分布 | 第11页 | ·肉毒毒素的理化性质和提取方法 | 第11-12页 | ·肉毒毒素的理化性质 | 第11-12页 | ·临床用肉毒毒素的制备 | 第12页 | ·肉毒毒素结构和作用方式 | 第12-14页 | ·降低释放机制的Ca~(2+)敏感性 | 第12-13页 | ·对胆碱能突触的专一性 | 第13页 | ·毒素结合区与其受体 | 第13-14页 | ·L链是酪氨酸特异蛋白激酶的底物 | 第14页 | ·BoNT检测及预防 | 第14-15页 | ·生物学试验方法 | 第14页 | ·免疫学试验方法 | 第14-15页 | ·PCR方法 | 第15页 | ·肉毒毒素中毒特点和预防 | 第15-17页 | ·肉毒毒素中毒的临床特点 | 第15-16页 | ·抗肉毒毒素蛋白疫苗的研究 | 第16-17页 | 第一章 A型肉毒毒素重链C末端保护性抗原的制备 | 第17-27页 | 1 材料和方法 | 第17-23页 | ·材料 | 第17-18页 | ·质粒和菌株 | 第17页 | ·试剂 | 第17页 | ·主要仪器设备 | 第17-18页 | ·主要液体试剂 | 第18页 | ·方法 | 第18-23页 | ·BoNT/AHc编码序列的优化设计与合成 | 第18-20页 | ·叠式PCR | 第20页 | ·连接反应 | 第20页 | ·细菌的转化 | 第20页 | ·菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第20-21页 | ·酶切鉴定阳性克隆 | 第21页 | ·转化表达菌株 | 第21页 | ·重组BoNTAHc的诱导表达 | 第21页 | ·Ni-NTA亲和层析柱制备 | 第21页 | ·重组BoNT/A的亲和纯化与复性 | 第21-22页 | ·Bradford法对重组BoNT/AHc蛋白进行定量 | 第22页 | ·重组BoNT/AHc蛋白的鉴定 | 第22-23页 | 2 结果 | 第23-26页 | ·BoNT/AHc编码序列的优化设计 | 第23-24页 | ·BoNT/AHc编码序列的合成与序列分析 | 第24页 | ·重组BoNT/AHc蛋白的表达 | 第24-25页 | ·重组BoNT/AHc蛋白的纯化和复性 | 第25-26页 | ·重组BoNT/AHc蛋白鉴定 | 第26页 | 3 分析和讨论 | 第26-27页 | 第二章 BoNT/A单克隆抗体的制备和免疫学特性鉴定 | 第27-38页 | 1 材料和方法 | 第27-33页 | ·材料 | 第27-29页 | ·主要试剂 | 第27页 | ·仪器设备 | 第27页 | ·细胞 | 第27页 | ·培养基和缓冲液 | 第27-29页 | ·方法 | 第29-33页 | ·重组抗原的制备 | 第29页 | ·小鼠免疫 | 第29页 | ·饲养细胞的制备 | 第29页 | ·脾细胞的制备 | 第29页 | ·细胞融合 | 第29-30页 | ·融合细胞的培养 | 第30页 | ·筛选(Screening) | 第30页 | ·克隆(Cloning) | 第30页 | ·体外扩大培养 | 第30页 | ·细胞冻存 | 第30-31页 | ·小鼠腹水制备 | 第31页 | ·单抗效价的测定 | 第31页 | ·杂交瘤细胞染色体鉴定 | 第31页 | ·亚类鉴定 | 第31-32页 | ·腹水单克隆抗体的纯化 | 第32页 | ·抗体纯度的鉴定 | 第32页 | ·蛋白绝对含量测定 | 第32页 | ·单克隆抗体的交叉反应性 | 第32页 | ·单克隆抗体的亲和力的测定 | 第32-33页 | 2 结果 | 第33-36页 | ·细胞融合 | 第33页 | ·杂交瘤克隆化结果 | 第33页 | ·单抗分类及效价测定 | 第33-34页 | ·单克隆抗体表位鉴定 | 第34页 | ·抗体亲和力测定 | 第34页 | ·单抗纯化结果 | 第34-35页 | ·纯化得率 | 第34-35页 | ·三株单抗腹水纯化的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第35页 | ·稳定性实验 | 第35-36页 | ·杂交瘤细胞染色体鉴定 | 第36页 | 3 讨论 | 第36-38页 | ·融合和阳性株筛选 | 第36-37页 | ·单抗的特异性鉴定 | 第37页 | ·关于单抗的纯化方法 | 第37页 | ·关于三株单抗抗原表位的鉴定 | 第37-38页 | 第三章 多克隆抗体及酶标抗体的制备与鉴定 | 第38-44页 | 1 材料和方法 | 第38-41页 | ·材料 | 第38页 | ·方法 | 第38-41页 | ·抗原的制备 | 第38页 | ·动物免疫 | 第38页 | ·抗血清的采集 | 第38-39页 | ·抗血清效价的测定 | 第39页 | ·抗血清多抗的纯化 | 第39页 | ·特异性鉴定 | 第39页 | ·纯化样品鉴定 | 第39页 | ·酶标抗体的制备与鉴定 | 第39-41页 | 2 结果 | 第41-43页 | ·动物免疫 | 第41-42页 | ·抗血清的特异性鉴定 | 第42页 | ·抗血清纯化结果 | 第42-43页 | ·SDS-PAGE电泳检测结果 | 第42-43页 | 3 分析和讨论 | 第43-44页 | ·酶标抗体的质量鉴定 | 第43页 | ·酶标抗体的纯化 | 第43页 | ·酶结合物的免疫学活性 | 第43-44页 | 第四章 肉毒毒素(BoNT/A)ELISA检测方法的建立和试剂盒的组装 | 第44-52页 | 1 材料和方法 | 第44-46页 | ·材料 | 第44页 | ·方法 | 第44-46页 | ·抗体最佳包被浓度的选择 | 第44页 | ·抗体最佳包被条件的选择 | 第44页 | ·间接竞争ELISA法检测步骤的确定 | 第44页 | ·双抗夹心ELISA法检测步骤的确定 | 第44-45页 | ·线性范围及检测限的确定 | 第45页 | ·标准曲线的绘制 | 第45页 | ·测定人工污染样品中BoNT/A的回收率 | 第45页 | ·试剂盒组装和操作 | 第45-46页 | 2 结果 | 第46-49页 | ·抗体最佳包被浓度的选择 | 第46页 | ·抗体最佳包被条件的选择 | 第46-47页 | ·间接竞争ELISA条件的建立 | 第47页 | ·夹心ELISA试剂盒条件分析 | 第47-48页 | ·试剂盒检测BoNT/A的标准曲线制备 | 第48-49页 | ·人工污染样品中BoNT/A的回收率 | 第49页 | ·稳定性试验 | 第49页 | 3 分析和讨论 | 第49-52页 | ·抗体校价确定 | 第50页 | ·抗体的纯度和蛋白含量鉴定 | 第50页 | ·抗体的浓度确定 | 第50页 | ·试剂盒检测的灵敏度 | 第50页 | ·试剂盒检测的特异性 | 第50-51页 | ·结果判定与计算 | 第51-52页 | 结论 | 第52-53页 | 参考文献 | 第53-59页 | 缩略词表 | 第59-60页 | 作者简介 | 第60-61页 | 致谢 | 第61页 |
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