| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-15页 |
| 1.1 玉米大斑病菌转化体系的构建 | 第11-12页 |
| 1.2 NPS6 基因的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 基于 Gateway 技术的快速构建敲除载体的方法 OSCAR | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第14-15页 |
| 第2章 玉米大斑病菌 T-DNA 插入突变体库的构建及致病性相关突变体的筛选 | 第15-27页 |
| 2.1 材料与方法 | 第15-21页 |
| 2.1.1 供试菌株与载体 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基 | 第15-16页 |
| 2.1.3 玉米大斑病菌转化用培养基 | 第16页 |
| 2.1.4 农杆菌感受态细胞的制备以及转化 | 第16-17页 |
| 2.1.5 pBI-G3C 转入 AGL-1 感受态细胞 | 第17页 |
| 2.1.6 农杆菌介导的玉米大斑病菌的遗传转化 | 第17-18页 |
| 2.1.7 玉米大斑病菌转化子的检测 | 第18-19页 |
| 2.1.8 玉米大斑病菌转化子的 PCR 检测 | 第19-20页 |
| 2.1.9 玉米大斑病菌转化子抗 HPH 稳定性检测 | 第20页 |
| 2.1.10 致病力减弱突变体的筛选 | 第20-21页 |
| 2.1.11 致病力减弱突变体生长速率观察 | 第21页 |
| 2.1.12 致病力减弱突变体菌落形态观察 | 第21页 |
| 2.1.13 致病力减弱突变体产孢分析 | 第21页 |
| 2.2 结果与分析 | 第21-26页 |
| 2.2.1 构建了玉米大斑病菌 T-DNA 插入突变体库 | 第21页 |
| 2.2.2 玉米大斑病菌转化子的 PCR 鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 玉米大斑病菌阳性转化子潮霉素抗性的稳定遗传 | 第22-23页 |
| 2.2.4 致病性减弱突变体的筛选 | 第23页 |
| 2.2.5 致病性减弱突变体的生长速率、菌落形态的观察 | 第23-24页 |
| 2.2.6 致病性减弱突变体的菌丝、分生孢子形态的观察 | 第24-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-27页 |
| 第3章 ATMT184 转化子 T-DNA 插入位点的确定 | 第27-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-33页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 玉米大斑病菌基因组 DNA 的提取 | 第27页 |
| 3.1.3 大肠杆菌感受态细胞的制备以及转化 | 第27-28页 |
| 3.1.4 Southern-bloting 分析 | 第28-31页 |
| 3.1.5 交错式热不对称 PCR | 第31-32页 |
| 3.1.6 TAIL-PCR 产物回收 | 第32页 |
| 3.1.7 TAIL-PCR 产物的测序 | 第32-33页 |
| 3.1.8 序列分析及插入位点的鉴定 | 第33页 |
| 3.2 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.2.1 ATMT184 转化子为 T-DNA 单拷贝插入 | 第33-34页 |
| 3.2.2 ATMT184 的 T-DNA 插入位点为 StNPS6 基因启动子区域 | 第34-36页 |
| 第4章 StNPS6 基因的敲除 | 第36-44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第36页 |
| 4.1.2 培养基以及菌株的培养条件 | 第36页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第36-38页 |
| 4.1.4 质粒 DNA 的提取 | 第38页 |
| 4.1.5 PCR 扩增 StNPS6 基因左右臂序列 | 第38-39页 |
| 4.1.6 StNPS6 基因敲除突变体的获得 | 第39-40页 |
| 4.2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 4.2.1 构建敲除载体流程示意图 | 第40页 |
| 4.2.2 StNPS6 基因敲除载体示意图 | 第40-41页 |
| 4.2.3 StNPS6 基因左右臂的获得 | 第41页 |
| 4.2.4 StNPS6 基因敲除载体 pOSCARNPS6 的 PCR 验证 | 第41-42页 |
| 4.2.5 转化敲除载体 pOSCARNPS6 的农杆菌的 PCR 验证 | 第42页 |
| 4.2.6 转化子的验证 | 第42-44页 |
| 第5章 △StNPS6 基因在玉米大斑病菌致病过程中的功能分析 | 第44-54页 |
| 5.1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 5.1.1 供试菌株与寄主 | 第44页 |
| 5.1.2 培养基以及菌株的培养条件 | 第44页 |
| 5.1.3 玉米大斑病菌总 RNA 的提取 | 第44-45页 |
| 5.1.4 生长速率观察 | 第45页 |
| 5.1.5 菌落形态观察 | 第45页 |
| 5.1.6 产孢分析 | 第45页 |
| 5.1.7 H2O2敏感性测定 | 第45-46页 |
| 5.1.8 铁胁迫的敏感性测定 | 第46页 |
| 5.1.9 2,2'-联吡啶（2DP）压力下回补三价铁离子的实验 | 第46页 |
| 5.1.10 铁胁迫条件下，野生型菌株中 StNPS6 的表达量分析 | 第46页 |
| 5.1.11 △StNPS6 对郑单 958 的致病力分析 | 第46页 |
| 5.2 结果与分析 | 第46-52页 |
| 5.2.1 StNPS6 缺失不影响玉米大斑病菌的营养生长 | 第46-48页 |
| 5.2.2 △StNPS6 对 H2O2的敏感性增强 | 第48-49页 |
| 5.2.3 △StNPS6 对 2DP 的敏感性增强 | 第49-50页 |
| 5.2.4 △StNPS6 在限制性浓度 2DP 压力下（铁胁迫下），回补三价铁 | 第50-51页 |
| 5.2.5 铁胁迫下，StNPS6 表达量分析 | 第51页 |
| 5.2.6 StNPS6 基因参与玉米大斑病菌侵染性菌丝扩展过程 | 第51-52页 |
| 5.3 讨论 | 第52-54页 |
| 第6章 研究结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
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