| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| 1.1 选题背景 | 第14-16页 |
| 1.2 里氏木霉简介 | 第16-17页 |
| 1.3 里氏木霉纤维素酶的研究进展 | 第17-24页 |
| 1.3.1 发酵条件影响里氏木霉纤维素酶的产生 | 第18-19页 |
| 1.3.2 里氏木霉纤维素酶的分泌 | 第19-21页 |
| 1.3.3 里氏木霉纤维素酶产生的调控机制 | 第21-22页 |
| 1.3.4 提高纤维素酶产量的有效途径 | 第22-24页 |
| 1.4 里氏木霉次级代谢产物黄色色素的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4.1 里氏木霉黄色色素的作用 | 第24-25页 |
| 1.4.2 里氏木霉色素产生的调控 | 第25页 |
| 1.5 论文的研究目的和内容 | 第25-29页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第25-26页 |
| 1.5.2 本论文选题思路及主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.3 本论文创新点 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二章 高产β-葡萄糖苷酶基因工程菌的应用及cel3d在高产纤维素酶中的作用 | 第36-66页 |
| 2.1 引言 | 第36-38页 |
| 2.2 实验部分 | 第38-47页 |
| 2.2.1 菌株、质粒 | 第38-39页 |
| 2.2.2 试剂、培养基和培养条件 | 第39-41页 |
| 2.2.3 里氏木霉RUT-C30 DNA的提取 | 第41页 |
| 2.2.4 里氏木霉RUT-C30 RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.5 BGL1表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.6 菌株遗传转化 | 第42-43页 |
| 2.2.7 纤维素酶活的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.8 TRB1碳源特异性评价 | 第44-45页 |
| 2.2.9 TRB1的葡萄糖耐受性评价 | 第45页 |
| 2.2.10 DA预处理的玉米秸秆(EDA-PCS)的糖化分析 | 第45页 |
| 2.2.11 发酵上清液SDS-PAGE电泳和MUG (4-甲基伞形基-β -D-吡喃葡糖苷)酶谱分析 | 第45-46页 |
| 2.2.12 荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-61页 |
| 2.3.1 里氏木霉过表达bgl1基因表达载体的构建及琼脂糖凝胶电泳验证 | 第47-48页 |
| 2.3.2 里氏木霉转化子的筛选及验证 | 第48-49页 |
| 2.3.3 过表达bgl1基因对里氏木霉纤维素酶活的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.4 里氏木霉TRB1纤维素酶的高产特性不具有碳源依赖性 | 第50-52页 |
| 2.3.5 相比于里氏木霉RUT-C30,TRB1表现出了较好的或持平的碳代谢阻遏抑制作用 | 第52-54页 |
| 2.3.6 EDA-PCS的水解 | 第54-56页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE与MUG分析蛋白分泌特性 | 第56-57页 |
| 2.3.8 TRB1中cel3d基因表达被破坏 | 第57-61页 |
| 2.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 第三章 乳糖诱导下高产纤维素酶的里氏木霉工程菌SEU-7及其高产机制和应用 | 第66-102页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 实验部分 | 第68-76页 |
| 3.2.1 菌株、质粒以及培养条件 | 第68-69页 |
| 3.2.2 实验材料与试剂 | 第69页 |
| 3.2.3 菌株的培养 | 第69-70页 |
| 3.2.4 培养基以及所用试剂配方 | 第70页 |
| 3.2.5 里氏木霉基因工程菌的构建 | 第70-71页 |
| 3.2.6 菌株遗传转化 | 第71页 |
| 3.2.7 纤维素酶活的测定 | 第71页 |
| 3.2.8 发酵上清液SDS-PAGE电泳分析 | 第71-72页 |
| 3.2.9 EDA预处理玉米秸秆的糖化能力分析 | 第72页 |
| 3.2.10 基因拷贝数的检测 | 第72-73页 |
| 3.2.11 基因组重测序 | 第73-74页 |
| 3.2.12 荧光定量PCR | 第74-76页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第76-95页 |
| 3.3.1 高产纤维素酶基因工程菌的构建 | 第76-77页 |
| 3.3.2 里氏木霉基因工程菌SEU-7无论在纤维素还是乳糖诱导下相比于RUT-C30表现出了极强的产酶能力 | 第77-80页 |
| 3.3.3 乳糖浓度优化以及补料进一步提高了基因工程菌SEU-7的产酶能力 | 第80-83页 |
| 3.3.4 添加低浓度葡萄糖促进纤维素酶产生 | 第83-85页 |
| 3.3.5 高浓度葡萄糖仍可促进SEU-7纤维素酶的产生 | 第85-86页 |
| 3.3.6 里氏木霉SEU-7的生物学特性研究 | 第86-87页 |
| 3.3.7 里氏木霉SEU-7产生的纤维素酶的水解纤维素能力显著增加 | 第87-88页 |
| 3.3.8 并行突变的确定 | 第88-90页 |
| 3.3.9 过表达bgl1在里氏木霉SEU-7高产纤维素酶中起着重要作用 | 第90-92页 |
| 3.3.10 里氏木霉SEU-7纤维素酶、半纤维素酶基因以及调节因子的转录水平分析 | 第92-95页 |
| 3.4 本章小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 第四章 敲除基因121121过程中带来的并行突变在里氏木霉纤维素酶和黄色色素产生中的作用 | 第102-135页 |
| 4.1 引言 | 第103-106页 |
| 4.2 实验部分 | 第106-111页 |
| 4.2.1 菌株和试剂 | 第106-107页 |
| 4.2.2 ZC121121的构建及其在纤维素诱导下的产酶情况 | 第107页 |
| 4.2.3 里氏木霉RUT-C30和ZC121121的生长、显微镜观察以及孢子萌发 | 第107-108页 |
| 4.2.4 酶活以及生物质的检测 | 第108页 |
| 4.2.5 ZC121121、OE121121和RUT-C30在不同碳源条件下黄色色素的产生 | 第108页 |
| 4.2.6 RNA提取以及荧光定量PCR | 第108-111页 |
| 4.2.7 RNA-seq分析 | 第111页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第111-129页 |
| 4.3.1 里氏木霉ZC121121菌株的构建及纤维素酶的产生 | 第111-114页 |
| 4.3.2 121121基因干扰带来的并行突变导致了黄色色素分泌增加 | 第114-116页 |
| 4.3.3 敲除121121基因过程带来的并行突变抑制了不同碳源诱导条件下纤维素酶和半纤维素酶的产生 | 第116-118页 |
| 4.3.4 里氏木霉121121转化子ZC121121的特性 | 第118-119页 |
| 4.3.5 敲除121121基因过程带来的并行突变导致了纤维素条件和葡萄糖条件下纤维素酶调节因子表达量的变化 | 第119-125页 |
| 4.3.6 1212121调节pks相关基因及ypr1、ypr2和xpp1的表达 | 第125-126页 |
| 4.3.7 ZC121121中sorbicillin的生物合成 | 第126-128页 |
| 4.3.8 121121基因编码的蛋白具有广谱性 | 第128-129页 |
| 4.4 本章小结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-135页 |
| 第五章 里氏木霉纤维素酶产生、分布及分泌机理研究 | 第135-155页 |
| 5.1 引言 | 第135-137页 |
| 5.2 实验部分 | 第137-140页 |
| 5.2.1 菌株、质粒和培养条件 | 第137-138页 |
| 5.2.2 重组里氏木霉菌株的构建 | 第138页 |
| 5.2.3 菌株的生长 | 第138-139页 |
| 5.2.4 利用红色荧光蛋白跟踪纤维素酶的分布 | 第139页 |
| 5.2.5 原生质体的制备 | 第139页 |
| 5.2.6 BFA对里氏木霉纤维素酶合成的影响 | 第139-140页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第140-151页 |
| 5.3.1 转化子的构建 | 第140-141页 |
| 5.3.2 在所有检测的纤维素酶当中BGL出现的最早 | 第141-143页 |
| 5.3.3 BGL的分泌比CMC和CBH都慢 | 第143-145页 |
| 5.3.4 STED观察到BGL定位到细胞膜上 | 第145-146页 |
| 5.3.5 用FITC对β-葡萄糖苷酶和细胞膜进行共定位 | 第146-147页 |
| 5.3.6 采用原生质体制备的方法证明了BGL确实定位到了细胞膜上 | 第147-148页 |
| 5.3.7 RBGL、RCMC和RCBH与内质网染料的共染 | 第148-149页 |
| 5.3.8 BFA对里氏木霉中总蛋白合成的影响 | 第149-150页 |
| 5.3.9 CBH的分泌不经过或少量经过高尔基体 | 第150-151页 |
| 5.4 本章小结 | 第151页 |
| 参考文献 | 第151-155页 |
| 第六章 总结与展望 | 第155-158页 |
| 6.1 本论文工作总结 | 第155-156页 |
| 6.2 后续工作的展望 | 第156-158页 |
| 博士期间研究成果 | 第158-161页 |
| 致谢 | 第161页 |
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