| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩略词与英汉对照 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 花青素研究概况 | 第12-13页 |
| 1.2 花青素合成代谢相关结构基因 | 第13-20页 |
| 1.2.1 查尔酮合成酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 查尔酮异构酶 | 第15页 |
| 1.2.3 黄烷酮3羟化酶 | 第15页 |
| 1.2.4 二羟基黄酮醇4还原酶 | 第15-16页 |
| 1.2.5 花色素苷合成酶 | 第16页 |
| 1.2.6 类黄酮3O-葡糖基转移酶 | 第16页 |
| 1.2.7 乙酰辅酶A羧化酶 | 第16-18页 |
| 1.2.8 丙二酰辅酶A合成酶 | 第18-19页 |
| 1.2.9 Multidrug and Toxin Extrusion（MATE) | 第19-20页 |
| 1.3 VIGS分子机理 | 第20页 |
| 1.4 VIGS载体 | 第20-21页 |
| 1.5 目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 病毒载体 | 第22-23页 |
| 2.1.3 菌种 | 第23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第24页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 矮牵牛总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 实验用具的处理与药品的准备 | 第26页 |
| 2.2.1.2 RNA提取步骤 | 第26-27页 |
| 2.2.2 RNA的反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.3 VIGS基因片段的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 引物的设计 | 第28页 |
| 2.2.3.2 引物工作液的稀释 | 第28页 |
| 2.2.3.3 PCR扩增与检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 PCR产物的纯化回收 | 第29-30页 |
| 2.2.4 载体质粒的抽提 | 第30-31页 |
| 2.2.5 重组载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.5.1 目的基因片段与载体的连接 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.5.3 连接产物导入大肠杆菌（热激转化） | 第33页 |
| 2.2.5.4 阳性克隆的鉴定 | 第33页 |
| 2.2.5.5 重组质粒的抽提 | 第33-34页 |
| 2.2.6 重组质粒导入农杆菌 | 第34-35页 |
| 2.2.6.1 农杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| 2.2.6.2 重组质粒导入农杆菌 | 第34-35页 |
| 2.2.7 农杆菌侵染矮牵牛植株 | 第35页 |
| 2.2.7.1 侵染液的配制 | 第35页 |
| 2.2.7.2 侵染方法 | 第35页 |
| 2.2.8 表型观察及材料处理 | 第35-37页 |
| 2.2.8.1 表型观察及采样 | 第35页 |
| 2.2.8.2 花青素的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.8.3 乙烯处理植株 | 第36页 |
| 2.2.8.4 实时荧光定量PCR | 第36页 |
| 2.2.8.5 相对电导率的测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 PhACC1、PhACC2和PhAAE13的克隆 | 第37-47页 |
| 3.1.1 PhACC1、PhACC2和PhAAE13 c DNA全长序列的分析 | 第37-46页 |
| 3.1.1.1 PhACC1和PhACC2 c DNA全长序列的分析 | 第37-41页 |
| 3.1.1.2 PhAAE13 c DNA全长序列的分析 | 第41-44页 |
| 3.1.1.3 PhAAE3和PhAAE14序列的分析 | 第44-46页 |
| 3.1.2 VIGS基因片段的克隆 | 第46-47页 |
| 3.1.3 pTRV2空白载体质粒的提取 | 第47页 |
| 3.2 VIGS重组载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.3 VIGS重组载体导入农杆菌 | 第49页 |
| 3.4 观察基因沉默表型 | 第49-57页 |
| 3.4.1 VIGS基因沉默对矮牵牛花的影响 | 第50-53页 |
| 3.4.1.1 PhACC1、PhACC2和PhAAE13基因沉默对花瓣颜色的影响 | 第50页 |
| 3.4.1.2 PhAAE3和PhAAE14基因沉默对花瓣颜色的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.1.3 PhACC1、PhACC2和PhAAE13基因沉默对花蕊颜色的影响 | 第51页 |
| 3.4.1.4 PhAAE3和PhAAE14基因沉默对花蕊颜色的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.1.5 PhMATE1和PhMATE2基因沉默对花色的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.2 PhACC1、PhACC2和PhAAE13沉默对矮牵牛果实的影响 | 第53页 |
| 3.4.3 基因沉默对花瓣花青素含量的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.4 花瓣不同发育阶段花青素含量的分析 | 第54-55页 |
| 3.4.5 PhACC1、PhACC2和PhAAE13沉默后相对表达量的分析 | 第55页 |
| 3.4.6 乙烯处理对PhACC1、PhACC2和PhAAE13相对表达量的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.7 PhACC1、PhACC2和PhAAE13沉默对植物抗寒性的影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论与结论 | 第57-60页 |
| 4.1 讨论 | 第57-59页 |
| 4.2 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67页 |
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