中文摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
目录 | 第6-9页 |
第一章 文献综述 | 第9-26页 |
1.1 纤维素乙醇 | 第9-12页 |
1.1.1 木质纤维素 | 第9-11页 |
1.1.2 木质纤维素乙醇生产工艺 | 第11-12页 |
1.2 纤维素酶简介 | 第12-14页 |
1.2.1 内切葡聚糖酶 | 第13页 |
1.2.2 外切葡聚糖酶 | 第13-14页 |
1.2.3 β-葡萄糖苷酶 | 第14页 |
1.2.4 纤维素酶来源 | 第14页 |
1.3 酿酒酵母 | 第14-22页 |
1.3.1 酿酒酵母简介 | 第14-15页 |
1.3.2 酿酒酵母遗传转化 | 第15-19页 |
1.3.3 酿酒酵母交配型 | 第19-20页 |
1.3.4 酿酒酵母有性重组 | 第20-21页 |
1.3.5 酿酒酵母多倍体和非整倍性菌株 | 第21-22页 |
1.4 纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达影响因素 | 第22-23页 |
1.5 纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达研究进展 | 第23-25页 |
1.6 本课题已有工作基础、研究目的意义和内容 | 第25-26页 |
1.6.1 已有工作基础 | 第25页 |
1.6.2 研究目的和意义 | 第25页 |
1.6.3 研究内容 | 第25-26页 |
第二章 实验材料与方法 | 第26-43页 |
2.1 实验材料 | 第26-33页 |
2.1.1 质粒、菌株与引物 | 第26-29页 |
2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第29-30页 |
2.1.4 培养基 | 第30-32页 |
2.1.5 主要溶液 | 第32-33页 |
2.2 实验方法 | 第33-43页 |
2.2.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第33-34页 |
2.2.2 酿酒酵母染色体 DNA 的快速分离提取 | 第34页 |
2.2.3 DNA 的限制酶消化 | 第34-35页 |
2.2.4 核酸的乙醇沉淀纯化 | 第35页 |
2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
2.2.6 酿酒酵母的转化 | 第35-36页 |
2.2.7 采用 PCR 法验证酿酒酵母交配型 | 第36-37页 |
2.2.8 酿酒酵母菌株高效产孢 | 第37页 |
2.2.9 孢子纯化方法 | 第37页 |
2.2.10 酿酒酵母倍性测定 | 第37页 |
2.2.11 酿酒酵母菌株世代时间(G)测定 | 第37-38页 |
2.2.12 酶活测定 | 第38-40页 |
2.2.13 玉米芯预处理 | 第40页 |
2.2.14 玉米芯/酸碱预处理玉米芯组分测定 | 第40-41页 |
2.2.15 菌株的评价 | 第41页 |
2.2.16 HPLC 测定发酵液中各组分 | 第41-43页 |
第三章 棘孢曲霉 BGL1 基因在酿酒酵母中的表达研究 | 第43-60页 |
3.1 酿酒酵母倍性和交配型对外源基因表达、菌株生长及产醇性能的影响 | 第43-56页 |
3.1.1 酿酒酵母 1N~4N 整倍性菌株的构建 | 第43-51页 |
3.1.2 倍性及交配型对 BGL 酶活的影响 | 第51-52页 |
3.1.3 倍性及交配型对菌株生长的影响 | 第52-54页 |
3.1.4 倍性及交配型对菌株发酵产醇性能的影响 | 第54-56页 |
3.2 酿酒酵母减数分裂所产孢子菌株的纤维素酶活性及生长和稳定性的考察 | 第56-58页 |
3.3 本章小结与讨论 | 第58-60页 |
3.3.1 小结 | 第58-59页 |
3.3.2 讨论 | 第59-60页 |
第四章 表达三类纤维素酶基因的酿酒酵母菌株构建及发酵评价 | 第60-77页 |
4.1 δ-整合策略构建酿酒酵母单倍体 CBP 菌株及其评价 | 第60-70页 |
4.1.1 菌株 LY-1 的构建 | 第61-62页 |
4.1.2 菌株 LY-2 的构建 | 第62-63页 |
4.1.3 菌株 LY-3 的构建 | 第63-64页 |
4.1.4 菌株 LY-4 的构建 | 第64-65页 |
4.1.5 菌株 LY-1~LY-4 的产醇和酶活分析 | 第65-67页 |
4.1.6 菌株 LY-3 利用纤维素发酵产醇条件初步优化 | 第67-70页 |
4.2 杂交菌株的构建及评价 | 第70-74页 |
4.2.1 菌株 LY-3 的构建 | 第71-73页 |
4.2.2 菌株 LY-3 与 W3 杂交构建二倍体菌株 | 第73页 |
4.2.3 杂交菌株评价 | 第73-74页 |
4.3 本章小结与讨论 | 第74-77页 |
4.3.1 小结 | 第74-75页 |
4.3.2 讨论 | 第75-77页 |
第五章 结论与展望 | 第77-79页 |
5.1 结论 | 第77-78页 |
5.2 展望 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-86页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第86-87页 |
致谢 | 第87页 |