| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 第一部分:CHEMERIN及其受体CHEMR23、GPR1基因的克隆及与成脂的关系 | 第16-50页 |
| 1 前言 | 第16-22页 |
| ·肥胖病的成因及影响 | 第16-17页 |
| ·肥胖病的临床影响 | 第16页 |
| ·"肥胖-炎症-胰岛素抵抗"的关系 | 第16页 |
| ·脂肪细胞及脂肪细胞因子 | 第16-17页 |
| ·Chemerin及其受体ChemR23、GPR1的概况 | 第17-22页 |
| ·Chemerin的发现以结构特点 | 第17-18页 |
| ·ChemR23、GPR1的发现以及结构特征 | 第18页 |
| ·Chemerin及其受体ChemR23的功能研究 | 第18-22页 |
| ·Chemerin与抗炎作用 | 第18-20页 |
| ·chemerin与机体脂肪生成 | 第20-21页 |
| ·chemerin与胰岛素敏感性 | 第21-22页 |
| ·研究的目的与意义 | 第22页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·样品采集 | 第22页 |
| ·菌株及质粒 | 第22-23页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24页 |
| 3 实验方法 | 第24-34页 |
| ·总RNA提取,纯化,鉴定及反转录 | 第24-26页 |
| ·总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·总RNA的纯化 | 第25-26页 |
| ·总DNA的纯度鉴定 | 第26页 |
| ·cDNA的合成 | 第26页 |
| ·质粒的大量提取与鉴定 | 第26-27页 |
| ·目标片段的扩增与纯化 | 第27-29页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23,GPR1的扩增引物设计 | 第27-28页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23,GPR1的扩增 | 第28-29页 |
| ·chemerin,ChemR23和GPR1的编码区的扩增 | 第28页 |
| ·PCR产物的检测、纯化、克隆与测序 | 第28-29页 |
| ·扩增片段的生物信息学分析 | 第29页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23,GPR1的组织表达谱分析 | 第29-31页 |
| ·模板的准备 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增指数期循环数的确定 | 第30页 |
| ·实时定量PCR | 第30页 |
| ·数据统计分析 | 第30-31页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23的基因组结构 | 第31-32页 |
| ·chemerin的内含子的扩增 | 第31页 |
| ·ChemR23的外显子的扩增 | 第31-32页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23,GPR1的染色体定位 | 第32页 |
| ·chemerin定位所用引物的设计 | 第32页 |
| ·PCR扩增分型方法 | 第32页 |
| ·数据分析方法 | 第32页 |
| ·ChemR23和GPR1的染色体电子定位 | 第32页 |
| ·chemerin及其受体ChemR23,GPR1与成脂的关系 | 第32-34页 |
| ·细胞培养与转染 | 第32-33页 |
| ·油红O染色 | 第33页 |
| ·双荧光素酶报告系统检测 | 第33页 |
| ·定量PCR及半定量PCR | 第33-34页 |
| ·数据统计与分析 | 第34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-48页 |
| ·Chemerin,ChemR23及GPR1的基因的克隆 | 第34-40页 |
| ·Chemerin,ChemR23及GPR1的组织表达谱 | 第40-41页 |
| ·Chemerin和ChemR23的基因组结构 | 第41-43页 |
| ·Chemerin,ChemR23及GPR1的染色体定位 | 第43-44页 |
| ·Chemerin,ChemR23及GPR1在成脂中的表达调控 | 第44-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 第二部分:CHEMERIN引起肝癌细胞脂代谢紊乱 | 第50-94页 |
| 1 前言 | 第50-55页 |
| ·非酒精性脂肪肝 | 第50-52页 |
| ·肝脏脂代谢 | 第52-55页 |
| ·脂质的消化,吸收和转运 | 第52-53页 |
| ·小肠内皮细胞乳糜微粒的形成和分解 | 第53页 |
| ·脂肪酸的合成 | 第53页 |
| ·脂肪酸的氧化 | 第53-54页 |
| ·VLDL的包装和分泌 | 第54-55页 |
| ·研究目的和意义 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-63页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·实验细胞 | 第55页 |
| ·菌株及质粒 | 第55页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·分子生物学软件 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-63页 |
| ·总RNA提取,纯化,鉴定及反转录 | 第56-57页 |
| ·基因的克隆与真核超表达载体的构建 | 第57页 |
| ·质粒的大量提取和鉴定 | 第57页 |
| ·细胞培养与转染 | 第57页 |
| ·油红O染色 | 第57页 |
| ·实时定量PCR | 第57-59页 |
| ·试剂盒使用简要说明 | 第59-63页 |
| ·Pierce~(?) BCA蛋白质定量测定试剂盒 | 第59-60页 |
| ·葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法) | 第60-61页 |
| ·己糖激酶(HK)测试盒 | 第61-62页 |
| ·甘油三酯GPO-POD酶法测定试剂盒 | 第62-63页 |
| ·数据统计分析 | 第63页 |
| 3 实验结果与分析 | 第63-88页 |
| ·不同chemerin形式及其受体ChemR23,GPR1的超表达载体的构建 | 第63-66页 |
| ·不同chemerin形式引起肝细胞脂代谢紊乱 | 第66-72页 |
| ·受体ChemR23和GPR1引起肝细胞脂代谢紊乱 | 第72-76页 |
| ·Chemerin引起肝细胞线粒体功能紊乱和增加肝细胞脂肪沉积 | 第76-81页 |
| ·模拟肥胖状态的高能量条件培养基抑制chemerin的mRNA表达 | 第81-84页 |
| ·Chemerin改善肝细胞炎症 | 第84-86页 |
| ·Chemerin对肝细胞糖代谢的影响 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-91页 |
| 5. 结论,创新点及不足之处 | 第91-94页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| ·创新点 | 第92-93页 |
| ·不足之处 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 附录 | 第106页 |
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