| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 论文创新点摘要 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-43页 |
| 1.1 选题背景与意义 | 第14-15页 |
| 1.2 GroEL-GroES的定义、功能及结构特征 | 第15-18页 |
| 1.2.1 GroEL-GroES的定义 | 第15页 |
| 1.2.2 GroEL-GroES的功能活性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 GroEL-GroES的结构特征 | 第16-18页 |
| 1.3 GroEL-GroES辅助蛋白折叠的研究 | 第18-26页 |
| 1.3.1 GroEL-GroES的作用底物 | 第18-19页 |
| 1.3.2 GroEL-GroES的 ATP循环 | 第19-22页 |
| 1.3.3 GroEL-GroES辅助蛋白折叠的作用模型 | 第22-26页 |
| 1.4 GPCRs的分类、结构、折叠机理及功能 | 第26-34页 |
| 1.4.1 GPCRs的定义及分类 | 第26-27页 |
| 1.4.2 GPCRs的结构 | 第27-28页 |
| 1.4.3 GPCRs的折叠机理 | 第28-33页 |
| 1.4.4 GPCRs的功能 | 第33-34页 |
| 1.5 趋化因子及趋化因子受体概述 | 第34页 |
| 1.6 本课题所采用的目标GPCRs概述 | 第34-37页 |
| 1.6.1 人体趋化因子受体5 号(CCR5) | 第35页 |
| 1.6.2 趋化因子受体-4(CXCR4) | 第35-36页 |
| 1.6.3 细菌视紫红质(BR) | 第36-37页 |
| 1.7 关键技术介绍 | 第37-41页 |
| 1.7.1 无细胞表达体系 | 第37-38页 |
| 1.7.2 GPCRs的瞬时酶解(Pulse Proteolysis) | 第38-39页 |
| 1.7.3 石英晶体微天平(QCM) | 第39页 |
| 1.7.4 荧光各向异性 | 第39-40页 |
| 1.7.5 等温量热滴定法(ITC) | 第40-41页 |
| 1.8 本文主要研究内容及拟解决的关键问题 | 第41-43页 |
| 第二章 GroEL-GroES对 CCR5 翻译表达折叠的作用研究 | 第43-68页 |
| 2.1 引言 | 第43页 |
| 2.2 实验材料与主要实验仪器 | 第43-46页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.2.3 主要实验溶液的配置 | 第45-46页 |
| 2.3 实验方法 | 第46-54页 |
| 2.3.1 实验材料的鉴定 | 第46-47页 |
| 2.3.2 pIVEX2.3d-CCR5 表达质粒的构建 | 第47页 |
| 2.3.3 CCR5 的无细胞表达 | 第47-48页 |
| 2.3.4 可溶性CCR5 的表征方法 | 第48-50页 |
| 2.3.5 表面活性剂的筛选 | 第50页 |
| 2.3.6 CCR5 表达量的测定 | 第50页 |
| 2.3.7 CCR5 的瞬时酶解 | 第50-52页 |
| 2.3.8 CCR5 结构稳定性实验 | 第52页 |
| 2.3.9 CCR5 与配体结合的QCM实验 | 第52-54页 |
| 2.4 实验结果 | 第54-64页 |
| 2.4.1 所购蛋白材料的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4.2 CCR5 质粒的构建 | 第55-56页 |
| 2.4.3 CCR5 在无细胞体系中的可溶性表达 | 第56-58页 |
| 2.4.4 GroEL-GroES辅助CCR5 折叠的研究 | 第58-60页 |
| 2.4.5 GroEL-GroES对 CCR5 结构稳定性的影响 | 第60-61页 |
| 2.4.6 GroEL-GroES对 CCR5 生物活性的影响 | 第61-64页 |
| 2.5 讨论 | 第64-67页 |
| 2.6 本章小结 | 第67-68页 |
| 第三章 GroEL-GroES对 CXCR4 翻译折叠过程及溶解性的影响 | 第68-85页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 实验材料与主要实验仪器 | 第68-69页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第68页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第68-69页 |
| 3.2.3 主要实验溶液的配置 | 第69页 |
| 3.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 3.3.1 pIVEX2.3d_CXCR4 表达载体的构建 | 第69页 |
| 3.3.2 CXCR4 的无细胞表达 | 第69-70页 |
| 3.3.3 CXCR4 的表征方法 | 第70页 |
| 3.3.4 表面活性剂筛选 | 第70页 |
| 3.3.5 CXCR4 翻译折叠动力学的研究 | 第70-71页 |
| 3.3.6 CXCR4 结构稳定性的研究 | 第71页 |
| 3.3.7 配体结合实验 | 第71页 |
| 3.3.8 BR的变性及样品的准备 | 第71页 |
| 3.3.9 BR与 GroEL及 SR1 结合的ITC测定 | 第71页 |
| 3.3.10 变性态BR的复折叠实验 | 第71-72页 |
| 3.3.11 变性态BR复折叠过程的酶解实验 | 第72页 |
| 3.4 实验结果 | 第72-81页 |
| 3.4.1 CXCR4 在大肠杆菌无细胞体系中的可溶性表达 | 第72-73页 |
| 3.4.2 GroEL-GroES对 CXCR4 翻译折叠过程及溶解性的影响 | 第73-75页 |
| 3.4.3 GroEL-GroES增强CXCR4 的结构稳定性 | 第75-76页 |
| 3.4.4 GroEL-GroES对 CXCR4 生物活性的影响 | 第76-77页 |
| 3.4.5 变性态BR和天然态BR分别与GroEL结合过程的考察 | 第77-80页 |
| 3.4.6 GroES和 ATP对 GroEL辅助BR折叠过程的影响 | 第80-81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-84页 |
| 3.6 本章小结 | 第84-85页 |
| 第四章 GroEL与 CXCR4 跨膜多肽相互作用的机制研究 | 第85-103页 |
| 4.1 引言 | 第85页 |
| 4.2 实验材料与主要实验仪器 | 第85-86页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第85-86页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第86页 |
| 4.2.3 主要实验溶液的配置 | 第86页 |
| 4.3 实验部分 | 第86-90页 |
| 4.3.1 CXCR4 跨膜多肽的质谱检测 | 第86页 |
| 4.3.2 CXCR4 跨膜多肽的高效液相分析 | 第86-87页 |
| 4.3.3 荧光各向异性实验 | 第87-89页 |
| 4.3.4 等温量热滴定实验(ITC) | 第89页 |
| 4.3.5 ATPase活性测定实验 | 第89-90页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第90-101页 |
| 4.4.1 CXCR4 跨膜多肽的设计合成及鉴定 | 第90-92页 |
| 4.4.2 CXCR4 跨膜多肽与GroEL结合的热力学和动力学分析 | 第92-95页 |
| 4.4.3 CXCR4 跨膜多肽与SBP对 GroEL竞争性结合的分析 | 第95-97页 |
| 4.4.4 CXCR4 跨膜多肽与单环GroEL(SR1)的结合研究 | 第97-98页 |
| 4.4.5 ATP和 GroES对跨膜多肽与GroEL结合及解离过程的影响 | 第98-100页 |
| 4.4.6 GroEL和 SR1的ATP酶水解活性研究 | 第100-101页 |
| 4.5 本章小结 | 第101-103页 |
| 结论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-124页 |
| 附录 | 第124-133页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 作者简介 | 第136页 |
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