| 缩略词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一部分 副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因的体外扩增、克隆及序列分析 | 第18-38页 |
| 材料与方法 | 第18-26页 |
| 一、 材料 | 第18-20页 |
| 二、 实验方法 | 第20-26页 |
| (一) 引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| (二) VP14-90基因组DNA的提取 | 第21页 |
| (三) tlh基因高保真扩增 | 第21-22页 |
| (四) PCR产物加A反应 | 第22页 |
| (五) 目的基因tlh的纯化回收 | 第22页 |
| (六) tlh基因克隆 | 第22-23页 |
| (七) 重组克隆的筛选与鉴定 | 第23-25页 |
| (八) tlh基因的序列测定及同源性分析 | 第25页 |
| (九) tlh14-90基因的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-36页 |
| 一、 tlh14-90基因的扩增 | 第26页 |
| 二、 pGEM-tlh重组质粒的筛选和鉴定 | 第26页 |
| 三、 tlh14-90基因测序结果 | 第26-30页 |
| 四、 tlh14-90基因的生物信息学分析 | 第30-36页 |
| 讨论 | 第36-37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 副溶血弧菌不耐热溶血毒素重组表达质粒的构建及鉴定 | 第38-49页 |
| 材料与方法 | 第38-44页 |
| 一、 材料 | 第38-39页 |
| 二、 实验方法 | 第39-44页 |
| (一) 目的基因tlh14-90片断的获得 | 第39-40页 |
| (二) pET32a+质粒DNA的提取、限制性内切酶消化及纯化回收 | 第40页 |
| (三) 表达载体的构建 | 第40-41页 |
| (四) 重组质粒的筛选和鉴定 | 第41-42页 |
| (五) 免疫印迹(Western-blot)检测目的蛋白的表达 | 第42-44页 |
| 结果 | 第44-47页 |
| 一、 重组表达载体pET32a-tlh的酶切及PCR鉴定 | 第44页 |
| 二、 阳性重组克隆(pET32a-tlh/DE3)的诱导表达鉴定 | 第44-46页 |
| 三、 免疫印迹(Western-blot)检测结果 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 第三部分 重组蛋白的表达与纯化 | 第49-59页 |
| 材料与方法 | 第49-52页 |
| 一、 材料 | 第49-50页 |
| 二、 实验方法 | 第50-52页 |
| (一) 表达产物可溶性的确定 | 第50页 |
| (二) tlh14-90基因在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析 | 第50页 |
| (三) 表达产物的纯化 | 第50-52页 |
| 结果 | 第52-57页 |
| 一、 tlh14-90基因在大肠杆菌中的表达及可溶性 | 第52页 |
| 二、 表达条件的优化 | 第52-53页 |
| 三、 表达蛋白的纯化 | 第53-57页 |
| 讨论 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 第四部分 副溶血弧菌不耐热毒素的复性、免疫原性及功能的研究 | 第59-76页 |
| 材料与方法 | 第59-65页 |
| 一、 材料 | 第59-60页 |
| 二、 实验方法 | 第60-65页 |
| (一) 纯化蛋白的复性 | 第60页 |
| (二) 功能研究 | 第60-61页 |
| (三) 免疫原性的研究 | 第61-65页 |
| 结果 | 第65-73页 |
| 一、 复性结果 | 第65页 |
| 二、 复性蛋白TLH14-90的功能研究 | 第65-73页 |
| (一) 溶血功能 | 第65页 |
| (二) 兔肠结扎实验 | 第65页 |
| (三) 兔肠病理改变结果 | 第65-66页 |
| (四) 耐热实验 | 第66页 |
| (五) 免疫原性的研究 | 第66页 |
| (六) 保护性抗原作用 | 第66页 |
| (七) 溶血抑制实验 | 第66-73页 |
| 讨论 | 第73-75页 |
| 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 综述 | 第82-88页 |
| 附录1: tlh14-90 GeneBank收录结果 | 第88-90页 |
| 附录2: TLH14-90 GeneBank收录结果 | 第90-91页 |
| 附录3: 硕士期间论文发表情况 | 第91-92页 |
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