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野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病相关基因的鉴定及分析
 
     论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 前言第11-28页
 1.1 植物病原细菌概述第11-16页
  1.1.1 土壤杆菌属第12页
  1.1.2 欧文氏菌属第12-13页
  1.1.3 假单胞菌属第13页
  1.1.4 罗尔斯通氏菌第13-14页
  1.1.5 黄单胞菌属第14页
  1.1.6 木质部小菌属第14-15页
  1.1.7 泛生菌属第15页
  1.1.8 棒状杆菌属第15-16页
 1.2 植物病原细菌的致病因子和致病基因第16-27页
  1.2.1 植物病原细菌的致病因子及编码致病因子的基因第16-22页
   1.2.1.1 胞外多糖第16-17页
   1.2.1.2 脂多糖第17-18页
   1.2.1.3 胞外酶第18页
   1.2.1.4 植物毒素第18-19页
   1.2.1.5 三型分泌的效应物第19-22页
  1.2.2 致病相关基因─致病因子合成的调控,加工,分泌,以及转运的基因第22-27页
   1.2.2.1 EPS产生相关基因第22-23页
   1.2.2.2 LPS产生相关基因第23页
   1.2.2.3 胞外酶产生相关基因第23-24页
   1.2.2.4 毒素产生相关基因第24-25页
   1.2.2.5 III型分泌系统第25-27页
 1.3 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病机理的研究进展第27-28页
第二章 材料与方法第28-53页
 2.1 供试菌株和质粒第28-29页
 2.2 本研究所用的引物第29-30页
 2.3 常用抗生素第30-31页
 2.4 细菌培养基第31-32页
 2.5 菌株培养条件及保存第32页
 2.6 细菌生长曲线的测定第32页
 2.7 胞外多糖的检测第32页
 2.8 胞外酶的检测第32-33页
 2.9 致病性检测第33页
 2.10 从叶片中回收被接种的细菌第33页
 2.11 高敏反应检测第33页
 2.12 β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性的检测第33-34页
 2.13 三亲本接合第34-35页
 2.14 两亲本接合第35页
 2.15 质粒DNA的提取第35-36页
 2.16 Xcc总DNA的提取第36页
 2.17 DNA的纯化第36页
 2.18 DNA的酶切、电泳及 DNA片段浓度、大小测算第36-37页
 2.19 DNA片段的回收第37-38页
  2.19.1 低熔点琼脂糖凝胶法第37页
  2.19.2 透析法回收DNA片段第37-38页
 2.20 载体脱磷酸化处理第38页
 2.21 DNA连接第38-39页
 2.22 质粒DNA的转化第39-40页
  2.22.1 快速制备E.coli的感受态细胞-CaCl_2法第39页
  2.22.2 转化反应第39页
  2.22.3 质粒DNA的电脉冲转化第39-40页
 2.23 PCR扩增反应第40-41页
  2.23.1 常规 PCR反应第40页
  2.23.2 融合 PCR反应第40页
  2.23.3 反转录 PCR(RT-PCR)第40-41页
 2.24 提取G-细菌总RNA第41-42页
  2.24.1 提取总 RNA前的准备及注意事项第41-42页
  2.24.2 从G-细菌中提取总 RNA操作步骤第42页
 2.25 芯片杂交的方法第42页
 2.26 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的制备第42-43页
 2.27 蛋白的表达,纯化及酶活性检测第43-44页
  2.27.1 蛋白质的表达第43页
  2.27.2 蛋白的纯化第43-44页
  2.27.3 GpdA的酶活性检测第44页
 2.28 突变体的构建第44-49页
  2.28.1 Xcc的Tn5gusA5插入突变体的构建第44页
  2.28.2 Xcc标记置换突变体的构建第44-45页
  2.28.3 Xcc定点整合突变体的构建第45-49页
  2.28.4 Xcc缺失突变体构建第49页
 2.29 突变体的互补第49页
 2.30 常用溶液与缓冲液第49-53页
第三章 致病力下降的Tn5gusAS插入突变体中突变位点与致病力下降的关系第53-58页
 3.1 引言第53页
 3.2 结果第53-57页
 3.3 讨论第57-58页
第四章 marR家族转录调控子hgiA受hrpG和hrpX调控并参与野油菜黄单胞菌野油菜致病变种的致病过程第58-74页
 4.1 引言第58-59页
 4.2 结果第59-72页
  4.2.1 hgjA非极性突变体的构建第59-60页
  4.2.2 NK2827的互补第60-61页
  4.2.3 hgiA是Xcc致病所需要的第61-62页
  4.2.4 NK2827在不同寄主植物上的致病力的差异第62-64页
  4.2.5 NK2827能够产生正常的 HR反应第64-65页
  4.2.6 hgiA突变不影响Xcc在培养基上的生长第65-66页
  4.2.7 hgiA突变不影响已知致病因子的产生第66-67页
  4.2.8 hgiA是一个独立的转录单位第67页
  4.2.9 hgiA基因的表达在丰富培养基上受到抑制,而在基本培养基和植物体内受到诱导第67-69页
  4.2.10 hgiA在基本培养基及植物体内的诱导表达依赖hrpG和hrpX第69-71页
  4.2.11 hgiA调控元的鉴定第71-72页
 4.3 讨论第72-74页
第五章 以NAD(P)为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶是野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病所需要的第74-89页
 5.1 引言第74-75页
 5.2 结果第75-88页
  5.2.1 gpdA非极性突变体的构建第75-76页
  5.2.2 NK0214的互补第76-77页
  5.2.3 gpdA是Xcc致病所需要的第77-78页
  5.2.4 gpdA是Xcc在寄主植物叶内生长所需要的第78页
  5.2.5 gpdA突变不影响Xcc的HR反应第78-79页
  5.2.6 gpdA的突变影响Xcc在基本培养基上的生长第79-81页
  5.2.7 gpdA基因编码的产物具有3-磷酸甘油脱氢酶的活性第81-82页
   5.2.8.1 蛋白质表达质粒pET0214的构建第81页
   5.2.8.2 GPDH(3-磷酸甘油脱氢酶)蛋白质的表达,纯化及酶活性检测第81-82页
  5.2.9 以FAD为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶基因glpD在Xcc致病过程中没有作用第82-85页
  5.2.8 Xcc可能存在另一个编码NAD为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶的基因第85-88页
 5.3 讨论第88-89页
第六章 CsrA在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中是一个全局调控子第89-106页
 6.1 引言第89-90页
 6.2 结果第90-104页
  6.2.1 不同种属细菌中CsrA氨基酸序列的保守性第90页
  6.2.2 csrA非极性突变体的构建第90-92页
  6.2.3 csrA突变体NK2506的互补第92-93页
  6.2.4 csrA突变不影响Xcc在培养基上的生长第93-94页
  6.2.5 csrA是Xcc致病所需要的第94-95页
  6.2.6 csrA是引发HR反应所需要的第95-96页
  6.2.7 csrA突变对已知致病因子的产生的影响第96-97页
  6.2.8 csrA负调控糖原合成第97页
  6.2.9 csrA可能负调控生物膜的形成第97-98页
  6.2.10 csrA正调控细胞的运动性第98页
  6.2.11 csrA调控元分析第98-104页
 6.3 讨论第104-106页
参考文献第106-124页
致谢第124页

 
 
论文编号BS1038433,这篇论文共124
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