| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-21页 |
| ·莽草酸的理化性质及其衍生物药理作用 | 第8-9页 |
| ·莽草酸的生产方法 | 第9-11页 |
| ·植物提取法 | 第9页 |
| ·化学法 | 第9-10页 |
| ·生物转化法 | 第10-11页 |
| ·发酵法 | 第11页 |
| ·大肠杆菌中莽草酸合成途径 | 第11-12页 |
| ·莽草酸合成途径的工程化修饰及改造 | 第12-13页 |
| ·莽草酸激酶缺失菌株 | 第12-13页 |
| ·EPSP 合酶缺失菌株 | 第13页 |
| ·PTS 系统的工程化修饰和改造 | 第13-16页 |
| ·大肠杆菌葡萄糖转运系统——PTS 系统 | 第13-14页 |
| ·改造大肠杆菌 PTS 系统优势及对莽草酸合成的影响 | 第14-15页 |
| ·GalP 转运系统 | 第15页 |
| ·Glf 转运系统 | 第15-16页 |
| ·国内外研究进展 | 第16-19页 |
| ·本课题研究意义与内容 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第21-22页 |
| ·引物 | 第22-23页 |
| ·培养基和培养条件 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·运动发酵单胞菌染色体 DNA 的提取 | 第24页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取、DNA 片段纯化、酶切及连接 | 第24页 |
| ·glf 基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·同源重组打靶片段的制备 | 第25页 |
| ·Red 重组系统的诱导和电转化感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·重组大肠杆菌发酵实验 | 第26页 |
| ·发酵产物检测 | 第26-27页 |
| ·其他细胞培养及分子操作 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-53页 |
| ·E. coli W3110 PTS 系统的改造 | 第28-34页 |
| ·EⅡCBGlc编码基因 ptsG 的敲除 | 第28-29页 |
| ·磷酸组氨酸搬运蛋白基因 ptsI 的敲除 | 第29-30页 |
| ·葡萄糖易化体蛋白基因 glf 在染色体上的整合表达 | 第30-32页 |
| ·重组菌 G1，I1，I2 的生理特性研究 | 第32-34页 |
| ·莽草酸合成菌的构建 | 第34-38页 |
| ·aroL 基因的敲除 | 第34-35页 |
| ·aroK 基因的敲除 | 第35-36页 |
| ·重组菌 E. coli S1、S2、S3 的生理及发酵特性研究 | 第36-37页 |
| ·重组菌 E. coli S4、S5 的构建及发酵特性研究 | 第37-38页 |
| ·莽草酸合成途径的强化 | 第38-43页 |
| ·重组质粒 pEtac-EB 的构建 | 第38-40页 |
| ·AroF 反馈抑制的解除 | 第40-42页 |
| ·重组菌生长及发酵特性研究 | 第42-43页 |
| ·影响发酵培养条件因素的初步探究 | 第43-51页 |
| ·培养基中氮源的添加对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第43-44页 |
| ·培养基中酵母粉添加量对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第44页 |
| ·培养基中胰蛋白胨添加量对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第44-45页 |
| ·培养基中酪氨酸添加量对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第45-46页 |
| ·培养基中葡萄糖添加量对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第46-47页 |
| ·添加 IPTG 时机对重组菌生长及产莽草酸的影响 | 第47-48页 |
| ·较优发酵培养基的确定 | 第48-50页 |
| ·不同培养基中重组菌株生长与发酵性能的测定 | 第50-51页 |
| ·6 L 发酵罐发酵实验 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第53-54页 |
| 展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录A | 第60-63页 |
| 附录B | 第63页 |
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