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奶山羊乳腺组织乳脂代谢相关miRNAs的筛选及功能验证
 
     论文目录
 
摘要第6-9页
ABSTRACT第9-11页
第一章 文献综述第16-33页
    1.1 动物microRNAs(miRNAs)的生物学特征第16-21页
        1.1.1 MiRNAs的生成第16-17页
        1.1.2 MiRNAs的序列及功能特点第17-18页
        1.1.3 MiRNAs调控下游基因表达的原理第18-20页
        1.1.4 调控miRNAs表达的分子机制第20-21页
    1.2 MiRNAs在动物生长、发育中的功能第21-22页
        1.2.1 MiRNAs调控个体发育的功能第21页
        1.2.2 MiRNAs调控哺乳动物组织发育的功能第21页
        1.2.3 MiRNAs对乳腺发育的调控作用第21-22页
    1.3 MiRNAs对脂质代谢的调控作用第22-26页
        1.3.1 MiRNAs调控肝脏脂质代谢第22-24页
        1.3.2 MiRNAs调控脂肪组织和细胞中的脂肪代谢第24-25页
        1.3.3 MiRNAs调控其它组织和细胞中的脂质代谢第25-26页
    1.4 乳腺组织乳脂代谢分子机制第26-32页
        1.4.1 乳脂肪与其它组织中脂肪的区别第26页
        1.4.2 山羊乳脂肪的组成特点及功能第26-28页
        1.4.3 牛和小鼠乳腺组织乳脂代谢分子机制第28-31页
        1.4.4 山羊乳脂代谢分子机制研究进展第31-32页
    1.5 MiRNAs调控乳腺乳脂代谢分子机制研究进展第32页
    1.6 本研究的目的意义第32-33页
第二章 山羊乳腺组织miRNAs测序、生物信息学分析第33-47页
    2.1 材料与方法第33-36页
        2.1.1 主要试剂和仪器第33页
        2.1.2 动物样品采集、总RNA提取第33-34页
        2.1.3 Solexa测序第34-35页
        2.1.4 山羊乳腺组织miRNAs的生物信息学鉴定第35-36页
        2.1.5 山羊miRNAs特征分析第36页
    2.2 结果第36-43页
        2.2.1 总RNA样品检测结果第36-37页
        2.2.2 Solexa测序结果质量鉴定及小RNAs序列分析第37-38页
        2.2.3 山羊乳腺组织miRNAs序列分析第38-43页
    2.3 讨论第43-46页
        2.3.1 Solexa测序结果的质量第43页
        2.3.2 山羊乳腺组织小RNAs长度分布与功能第43-44页
        2.3.3 山羊miRNAs序列的生物信息学鉴定方法第44页
        2.3.4 山羊保守miRNAs的序列特征第44-46页
    2.4 小结第46-47页
第三章 泌乳中期和干奶期山羊乳腺组织差异表达miRNAs的筛选及功能预测第47-63页
    3.1 材料与方法第47-53页
        3.1.1 主要试剂和仪器第47-48页
        3.1.2 动物样品采集及总RNA提取第48页
        3.1.3 MiRNA cDNA合成与定量PCR第48-51页
        3.1.4 MiRNAs靶基因预测、GO富集和KEGG通路分析第51页
        3.1.5 山羊乳腺上皮细胞的培养第51-52页
        3.1.6 催乳素试验及细胞总RNA提取第52-53页
    3.2 结果第53-61页
        3.2.1 山羊乳腺组织泌乳中期和干奶期miRNAs表达分析第53-55页
        3.2.2 差异表达miRNAs靶基因的功能预测第55-57页
        3.2.3 调控山羊乳脂代谢miRNAs的筛选第57-61页
    3.3 讨论第61-62页
        3.3.1 MiRNAs在不同动物乳腺组织中的表达情况第61页
        3.3.2 MiRNAs对乳腺发育和脂肪代谢的调控作用第61页
        3.3.3 激素对miRNAs表达的调节作用第61-62页
    3.4 小结第62-63页
第四章 腺病毒介导的miRNAs在乳腺上皮细胞中的过表达研究第63-78页
    4.1 材料与方法第63-68页
        4.1.1 腺病毒载体构建所用试剂、材料和仪器第63页
        4.1.2 细胞培养所用试剂、材料和仪器第63-64页
        4.1.3 腺病毒载体构建第64-67页
        4.1.4 腺病毒载体pAd-miRNAs在HEK293细胞株中的包装和扩繁第67-68页
        4.1.5 病毒感染乳腺上皮细胞第68页
        4.1.6 细胞核染色第68页
    4.2 结果第68-76页
        4.2.1 重组腺病毒质粒pAd-miRNAs的构建及鉴定第68-71页
        4.2.2 pAd-miRNA包装和病毒扩繁第71页
        4.2.3 腺病毒介导miRNAs在GMEC中的过表达第71-76页
    4.3 讨论第76-77页
    4.4 小结第77-78页
第五章 MiR-103对山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢的调控作用研究第78-94页
    5.1 材料与方法第78-84页
        5.1.1 主要试剂和仪器第78-79页
        5.1.2 动物样品采集、总RNA提取第79页
        5.1.3 CDNA合成及定量PCR第79-82页
        5.1.4 脂滴油红O染色第82页
        5.1.5 甘油三酯提取、含量测定第82页
        5.1.6 脂肪酸提取、含量测定第82-83页
        5.1.7 MiRNA inhibitor转染乳腺上皮细胞第83页
        5.1.8 相关性分析第83-84页
    5.2 结果第84-91页
        5.2.1 细胞中脂滴形态观察结果第84页
        5.2.2 甘油三酯含量测定结果第84页
        5.2.3 脂肪酸含量分析结果第84-86页
        5.2.4 乳脂生成相关基因mRNAs检测结果第86-88页
        5.2.5 其它乳脂代谢相关基因表达量检测结果第88-89页
        5.2.6 MiR-103表达量抑制试验第89-90页
        5.2.7 MiR-1031与泛酸酶基因(PANK3)表达量的关联分析第90-91页
    5.3 讨论第91-93页
        5.3.1 研究miR-103调控乳脂合成功能的重要性第91-92页
        5.3.2 MiR-103对脂肪脂解、β-氧化的调控作用第92-93页
        5.3.3 MiR-103-1与PANK3第93页
    5.4 小结第93-94页
第六章 MiR-27a对山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢的调控作用研究第94-104页
    6.1 材料与方法第94-96页
        6.1.1 主要试剂和仪器第94页
        6.1.2 细胞总RNA提取、cDNA合成和定量PCR试验第94页
        6.1.3 油红O染色、甘油三酯含量测定及脂肪酸提取第94-95页
        6.1.4 Western blotting第95-96页
    6.2 结果第96-101页
        6.2.1 细胞中脂滴形态观察结果第96-97页
        6.2.2 甘油三酯含量测定结果第97页
        6.2.3 脂肪酸含量分析结果第97页
        6.2.4 乳脂合成相关基因mRNAs定量检测结果第97-99页
        6.2.5 PPARγ表达量检测结果第99-100页
        6.2.6 脂肪分解和β-氧化相关基因表达量检测结果第100-101页
    6.3 讨论第101-103页
        6.3.1 MiR-27a对GMEC乳脂代谢的调控作用第101页
        6.3.2 过表达miR-27a对不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸比例的影响第101-102页
        6.3.3 PPARγ对下游基因的调控作用第102-103页
        6.3.4 GMEC中脂滴分布情况第103页
    6.4 小结第103-104页
第七章 MiR-23a和miR-200a在山羊乳腺上皮细胞中的功能研究第104-115页
    7.1 材料与方法第104-105页
        7.1.1 主要试剂和仪器第104页
        7.1.2 动物样品采集、总RNA提取第104页
        7.1.3 细胞总RNA提取、cDNA合成和定量PCR第104-105页
        7.1.4 油红O含量与甘油三酯含量分析第105页
        7.1.5 MiRNAs表达量之间的关联分析第105页
    7.2 结果第105-111页
        7.2.1 MiR-23a过表达对乳脂合成的影响第105-107页
        7.2.2 MiR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响第107-108页
        7.2.3 协同表达miRNAs的鉴定第108-111页
    7.3 讨论第111-114页
        7.3.1 过表达miR-23a对乳脂合成的影响第111页
        7.3.2 不同物种miR-200a的功能及其对GMEC乳脂代谢的影响第111-112页
        7.3.3 乳脂代谢分子网络的初步建立第112-114页
    7.4 小结第114-115页
结论第115-116页
本研究的创新点第116-117页
存在问题及展望第117-118页
参考文献第118-133页
附录第133-137页
缩略词表(Abbreviation)第137-139页
致谢第139-140页
作者简介第140页

 
 
论文编号BS3929283,这篇论文共140
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