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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--cGAS在鸡天然免疫及病毒感染中的作用及分子机制
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cGAS在鸡天然免疫及病毒感染中的作用及分子机制
 
     论文目录
 
致谢第4-11页
摘要第11-12页
1. 文献综述第12-22页
    1.1 cGAS的发现及临床意义第12-14页
        1.1.1 cGAS的结构第12-13页
        1.1.2 cGAS的免疫功能第13-14页
        1.1.3 cGAS的演化第14页
    1.2 IFN的发现及临床意义第14-17页
        1.2.1 IFN的分类第15页
        1.2.2 IFN的产生第15页
        1.2.3 IFN的生物活性第15-17页
            1.2.3.1 抗病毒活性第15-16页
            1.2.3.2 抑制细胞分裂与抗肿瘤活性第16页
            1.2.3.3 调节免疫活性第16页
            1.2.3.4 其它活性第16页
            1.2.3.5 IFN的临床应用第16-17页
    1.3 白细胞介素的发现及临床意义第17-18页
        1.3.1 ILs的来源第17页
        1.3.2 ILs的生物学功能第17-18页
            1.3.2.1 促进免疫细胞的免疫反应第17-18页
            1.3.2.2 促进免疫细胞的自分泌和旁分泌第18页
            1.3.2.3 对免疫反应的调节第18页
    1.4 禽腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)第18-21页
        1.4.1 FadV的分类第18-19页
        1.4.2 FadV的基因组第19-20页
        1.4.3 FadV的致病性第20页
        1.4.4 IBH第20页
        1.4.5 HPS第20-21页
    1.5 展望第21-22页
2. 引言第22-24页
3. 材料与方法第24-40页
    3.1 材料第24-26页
        3.1.1 细胞和病毒第24页
        3.1.2 细胞培养材料第24页
        3.1.3 抗体第24页
        3.1.4 主要仪器设备第24-25页
        3.1.5 常规生化试剂的配制第25-26页
    3.2 方法第26-40页
        3.2.1 chcGAS分子克隆第26-30页
            3.2.1.1 chcGAS引物设计及合成第26-27页
            3.2.1.2 3×Flag-CMV-14-chcGAS重组质粒的构建第27-30页
        3.2.2 chcGAS结构以及系统发育分析第30-31页
            3.2.2.1 chcGAS一级结构分析第30页
            3.2.2.2 chcGAS二级结构分析第30页
            3.2.2.3 chcGAS三级结构分析第30页
            3.2.2.4 chcGAS组织分布表达谱第30页
            3.2.2.5 chcGAS系统发育分析第30-31页
        3.2.3 转染第31页
        3.2.4 chcGAS亚细胞定位分析第31页
        3.2.5 qRT-PCR分析第31-33页
            3.2.5.1 RNA提取第31页
            3.2.5.2 RNA反转录第31-32页
            3.2.5.3 qRT-PCR检测第32-33页
        3.2.6 免疫荧光分析第33页
        3.2.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot, WB)检测第33-35页
            3.2.7.1 蛋白收取第33-34页
            3.2.7.2 BCA蛋白含量测定第34页
            3.2.7.3 SDS-PAGE胶电泳第34页
            3.2.7.4 湿转法转膜第34-35页
        3.2.8 RNAi第35-36页
            3.2.8.1 siRNA引物设计与合成第35-36页
            3.2.8.2 siRNA转染及效率检测第36页
        3.2.9 彗星试验第36-37页
        3.2.10 FadV-4病毒滴度测定第37-38页
            3.2.10.1 病毒扩增第37页
            3.2.10.2 滴度测定第37-38页
        3.2.11 统计学分析第38-40页
4 结果与分析第40-60页
    4.1 3×Flag-CMV-14-chcGAS重组质粒的构建第40-43页
    4.2 chcGAS序列及结构分析第43-45页
    4.3 chcGAS的组织分布及系统发育分析第45-47页
    4.4 chcGAS的亚细胞定位第47-48页
    4.5 过表达chcGAS促进ifn-β和il-1β表达第48-49页
        4.5.1 在CEF细胞中过表达cGAS并使用外源刺激后检测ifn-β和il-1β表达第48页
        4.5.2 在LMH细胞中过表达cGAS并使用外源刺激后检测ifn-β和il-1β表达第48-49页
    4.6 chcGAS诱导的ifn-β及il-1β表达依赖于STING信号通路第49-51页
        4.6.1 构建siSTING、siTBK1、siIRF3的CEF细胞系及敲减效率检测第50页
        4.6.2 在CEF细胞中siSTING、siTBK1、siIRF3后过表达cGAS检测ifn-β和il-1β的表达第50-51页
    4.7. 敲减chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表达上调第51-54页
        4.7.1 在CEF及LMH细胞中sicGAS的效率检测第51-52页
        4.7.2 在CEF细胞中敲减chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表达上调第52-53页
        4.7.3 在LMH细胞中敲减chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和利il-1β表达上调第53-54页
    4.8 chcGAS可识别DNA损伤所产生的内源性dsDNA第54-56页
        4.8.1 Eto处理CEF细胞引起DNA损伤第55页
        4.8.2 Eto诱导DNA损伤所产生胞质dsDNA并且部分与chcGAS共定位第55-56页
        4.8.3 Eto诱导的DNA损伤反应激活了chcGAS介导的天然免疫反应第56页
    4.9 敲减chcGAS促进FadV-4的增殖第56-60页
5 讨论与结论第60-62页
    5.1 讨论第60-61页
    5.2 结论第61-62页
参考文献第62-70页
英文摘要第70-71页

 
 
论文编号BS4734433,这篇论文共71
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