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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--内切纤维素酶EGⅢ在毕赤氏酵母中的表达及其吸附催化动力学研究
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内切纤维素酶EGⅢ在毕赤氏酵母中的表达及其吸附催化动力学研究
 
     论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 绪论第7-22页
 1.1 纤维素酶的性质、结构、功能及用途第7-14页
  1.1.1 纤维素及纤维素酶第7-9页
  1.1.2 纤维素酶的研究进展第9-10页
  1.1.3 纤维素酶的性质及酶系的作用机制第10-11页
  1.1.4 纤维素酶的分子结构与功能及其催化的分子机制第11-13页
  1.1.5 纤维素酶的应用第13-14页
 1.2 纤维素内切葡聚糖酶 EGⅢ表达研究的现状第14-15页
 1.3 巴斯德毕赤氏酵母表达系统第15-21页
  1.3.1 表达系统的选择第15-16页
  1.3.2 表达载体的构成第16-18页
   1.3.2.1 启动子第16-17页
   1.3.2.2 筛选标记第17页
   1.3.2.3 其他序列第17-18页
  1.3.3 表达载体与宿主染色体的整合第18-19页
  1.3.4 外源基因在甲醇营养型酵母中的分泌表达第19-20页
   1.3.4.1 外源基因分泌表达的必要性第19-20页
   1.3.4.2 分泌信号肽序列第20页
  1.3.5 巴斯德毕赤氏酵母表达系统的应用前景第20-21页
 1.4 本论文的研究目的和意义第21-22页
第二章 纤维素内切酶 EGⅢ在 Pichia pastoris中的表达第22-44页
 2.1 导言第22-23页
 2.2 实验材料第23-26页
  2.2.1 菌株和质粒第23页
  2.2.2 分子克隆用酶和试剂第23页
  2.2.3 培养基和溶液第23-26页
 2.3 实验方法第26-38页
  2.3.1 菌株的活化培养第26页
  2.3.2 目的基因PCR模板的 SDS裂解法制备第26-27页
  2.3.3 目的基因EGⅢ的PCR扩增第27-28页
  2.3.4 目的基因片段的回收第28页
  2.3.5 重组质粒 pPIC9K-EGⅢ的构建第28-29页
  2.3.6 琼脂糖凝胶电泳第29页
  2.3.7 大肠杆菌电转化第29-30页
  2.3.8 大肠杆菌重组子的鉴定第30-31页
  2.3.9 转化酵母重组质粒的线性化第31页
  2.3.10 毕赤氏酵母电转化第31-32页
  2.3.11 酵母表达菌株基因组 DNA的提取第32-33页
  2.3.12 酵母阳性转化子的PCR检测第33-34页
  2.3.13 外源基因在酵母中的表达与检测第34页
  2.3.14 内切葡聚糖酶活性测定第34-38页
 2.4 结果与讨论第38-44页
  2.4.1 目的基因EGⅢ PCR扩增引物设计第38-39页
  2.4.2 重组质粒 pPIC9K-EGⅢ的构建第39-42页
  2.4.3 重组质粒向E.coli JM109中的转化第42页
  2.4.4 重组子的筛选及重组质粒的验证第42-43页
  2.4.5 毕赤氏酵母电转化及重组酵母菌的筛选第43页
  2.4.6 重组基因产物在毕赤氏酵母中的表达第43页
  2.4.7 重组基因产物的分析鉴定第43-44页
  2.4.8 内切葡聚糖酶酶活测定第44页
第三章 毕赤氏酵母工程菌 EGⅢ基因拷贝数与表达能力的研究第44-61页
 3.1 导言第44-46页
 3.2 实验材料第46-47页
 3.3 实验方法第47-51页
 3.4 结果与讨论第51-61页
  3.4.1 卡那霉素G418确定单拷贝菌株和多拷贝菌株第51-53页
  3.4.2 多拷贝菌株拷贝数确定结果第53-59页
  3.4.3 不同拷贝数菌株的摇瓶发酵第59-61页
第四章 EGⅢ吸附催化动力学研究第61-76页
 4.1 导言第61-62页
 4.2 纤维素酶吸附催化动力学研究理论背景和实验方法第62-70页
 4.3 实验结果和讨论第70-76页
  4.3.1 微晶纤维素吸附表面积测定第70-71页
  4.3.2 催化动力学研究结果第71-73页
  4.3.3 吸附动力学研究结果第73-76页
参考文献第76-81页
致谢第81页

 
 
论文编号BS1057134,这篇论文共81
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