| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 伴胞晶体的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 化学杀虫剂的优缺点和应用 | 第12页 |
| 1.1.3 生物杀虫剂和Bt制剂的应用 | 第12-14页 |
| 1.2 蛋白分泌方式 | 第14-20页 |
| 1.2.1 革兰氏阳性细菌的分泌途径 | 第14-17页 |
| 1.2.2 革兰氏阴性细菌的分泌途径 | 第17-19页 |
| 1.2.3 非经典分泌途径 | 第19-20页 |
| 1.3 信号肽改造 | 第20页 |
| 1.4 胞外蛋白种类和功能 | 第20-22页 |
| 1.4.1 胞外酶的种类 | 第20-21页 |
| 1.4.2 胞外酶的功能 | 第21-22页 |
| 1.4.3 HD73_1661 肽聚糖水解酶 | 第22页 |
| 1.5 研究内容和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 BT HD73中的蛋白组分泌情况分析 | 第23-57页 |
| 2.1 材料和方法 | 第23-24页 |
| 2.1.1 分析材料和工具 | 第23页 |
| 2.1.2 分析方法 | 第23-24页 |
| 2.2 Sec信号肽分析 | 第24-36页 |
| 2.2.1 含Sec信号肽的蛋白种类数目统计 | 第24-35页 |
| 2.2.2 Sec分泌蛋白对胞外蛋白的影响 | 第35-36页 |
| 2.3 Tat P途径信号肽分析 | 第36-43页 |
| 2.3.1 通过Tat途径分泌的蛋白种类 | 第36-43页 |
| 2.3.2 Tat途径对胞外蛋白分泌影响 | 第43页 |
| 2.4 Lipo P脂蛋白预测 | 第43-49页 |
| 2.4.1 Lipo分泌蛋白分类和数量 | 第44-49页 |
| 2.4.2 Lipo分泌蛋白功能总结及对蛋白分泌影响 | 第49页 |
| 2.5 带信号肽蛋白归类分析 | 第49-55页 |
| 2.5.1 不同功能蛋白的分泌或定位方式 | 第49-53页 |
| 2.5.2 分泌方式分析 | 第53-55页 |
| 2.6 小结 | 第55-57页 |
| 第3章 BT HD73的生长和胞外蛋白分析 | 第57-71页 |
| 3.1 材料和方法 | 第57-60页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 3.2 实验结果 | 第60-69页 |
| 3.2.1 Bt HD73和Bt HD73（△Plc R）在LB培养基中的生长曲线 | 第60-61页 |
| 3.2.2 不同时期Bt HD73(WT)和Bt HD73(△Plc R)显微镜观察 | 第61-62页 |
| 3.2.3 不同时期胞外蛋白分泌差异 | 第62-64页 |
| 3.2.4 胞外蛋白质谱和质谱分析结果 | 第64-69页 |
| 3.3 小结 | 第69-71页 |
| 第4章 BT菌株表达载体构建 | 第71-90页 |
| 4.1 材料、试剂与仪器 | 第71-74页 |
| 4.1.1 材料 | 第71-72页 |
| 4.1.2 试剂 | 第72-73页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第73-74页 |
| 4.2 实验方法 | 第74-80页 |
| 4.2.1 质粒的提取 | 第74页 |
| 4.2.2 PCR体系和程序 | 第74-75页 |
| 4.2.3 酶切反应体系 | 第75页 |
| 4.2.4 目的DNA片段的纯化与胶回收 | 第75-76页 |
| 4.2.5 连接 | 第76-77页 |
| 4.2.6 大肠杆菌感受态的制备和热激转化 | 第77页 |
| 4.2.7 Bt感受态制备和电激转化 | 第77-78页 |
| 4.2.9 细胞破碎和蛋白粗提 | 第78页 |
| 4.2.10 蛋白的Ni柱亲和层析 | 第78-79页 |
| 4.2.11 Western Blot检测Ni柱吸附洗脱蛋白 | 第79-80页 |
| 4.3 实验结果 | 第80-88页 |
| 4.3.1 αA3片段插入构建p HT315-αA31661gfp | 第80-81页 |
| 4.3.2 2601-his替换 1661-gfp | 第81-82页 |
| 4.3.3 pHT315-αA31661his的构建 | 第82-83页 |
| 4.3.4 pHT315-αA31661his转化Bt HD73(WT) | 第83-84页 |
| 4.3.5 转pHT315-αA31661his Bt HD73蛋白分析 | 第84-86页 |
| 4.3.6 Ni柱亲和层析 | 第86-87页 |
| 4.3.7 Western Blot检测Ni吸附蛋白 | 第87-88页 |
| 4.4 小结 | 第88-90页 |
| 第5章 总结讨论 | 第90-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-100页 |
| 附录 | 第100-106页 |
| 附录 1 p HT315-αA31661his测序比对结果和序列说明 | 第100-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
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