| 致谢 | 第1-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| ·昆虫定向遗传转化研究进展 | 第14-23页 |
| ·基于锌指蛋白DNA结合域的定向系统 | 第16-18页 |
| ·基于整合酶与结合蛋白DNA结合域的定向系统 | 第18页 |
| ·基于转座酶与结合蛋白DNA结合域的定向系统 | 第18-20页 |
| ·基于核酸内切酶与锌指蛋白DNA结合域的定向系统 | 第20-21页 |
| ·基于位点特异性重组酶的定向系统 | 第21-22页 |
| ·基于核酸的定向遗传转化系统 | 第22-23页 |
| ·家蚕遗传转化研究进展 | 第23-26页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 基本实验材料与方法 | 第27-39页 |
| ·实验材料 | 第27-30页 |
| ·菌种和载体 | 第27页 |
| ·昆虫、细胞系和细胞培养基 | 第27页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第27页 |
| ·其他试剂 | 第27-28页 |
| ·常用试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·家蚕基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·质粒载体的连接 | 第30页 |
| ·酶切和去磷酸化 | 第30-31页 |
| ·TG1感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第31页 |
| ·化学法转化TG1感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·DH10B电转化感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·电转化DH10B感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·枯草芽孢杆菌电转化方案 | 第33页 |
| ·EndoFree质粒DNA大量抽提 | 第33-35页 |
| ·家蚕细胞BmN,Bm-12和果蝇细胞S2的培养 | 第35页 |
| ·细胞冷冻保存 | 第35-36页 |
| ·冷冻细胞活化 | 第36页 |
| ·脂质体转染家蚕细胞 | 第36-37页 |
| ·Southern blot分析 | 第37-38页 |
| ·反向PCR分析 | 第38-39页 |
| 第三章 家蚕BmN细胞中八种启动子的活性比较 | 第39-53页 |
| ·前言 | 第39-40页 |
| ·实验材料与方法 | 第40-43页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·家蚕基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·Endorfree质粒DNA的提取 | 第41页 |
| ·脂质体转染家蚕细胞 | 第41-42页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第42页 |
| ·绿色荧光蛋白基因在家蚕细胞中的表达和检测 | 第42页 |
| ·数据处理 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·家蚕基因组DNA提取 | 第43页 |
| ·家蚕肌动蛋白A3启动子和丝素L链启动子PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| ·荧光素酶检测质粒载体构建 | 第44-50页 |
| ·荧光素酶检测 | 第50页 |
| ·用hr5-IE1启动子实现外源基因EGFP向家蚕基因组的整合 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 家蚕细胞中Ga14-piggyBac转座酶融合体介导的定向遗传转化分析 | 第53-64页 |
| ·前言 | 第53-54页 |
| ·实验材料与方法 | 第54-57页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·质粒pGDV1-UAS的构建 | 第54页 |
| ·EndoFree质粒DNA大量抽提 | 第54-55页 |
| ·转染 | 第55页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第55-57页 |
| ·重组质粒的分析 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·质粒pGDV1-UAS的构建结果 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的菌落PCR检测结果 | 第58-59页 |
| ·遗传转化效率分析结果 | 第59页 |
| ·遗传转化的定向性分析结果 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 家蚕细胞中LexA-piggyBac转座酶融合体介导的定向遗传转化分析 | 第64-73页 |
| ·前言 | 第64-65页 |
| ·实验材料与方法 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·质粒pGDV1-Lex-BS的构建 | 第65-66页 |
| ·质粒pIE-LexA-piggyBac的构建 | 第66页 |
| ·转染 | 第66页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第66页 |
| ·重组质粒的分析 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-71页 |
| ·质粒pGDV1-Lex-BS的构建结果 | 第66-68页 |
| ·质粒pIE-LexA-piggyBac的构建结果 | 第68-69页 |
| ·重组质粒的菌落PCR和酶切鉴定结果 | 第69-70页 |
| ·遗传转化效率分析结果 | 第70页 |
| ·遗传转化的定向性分析结果 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 家蚕EGFP-Lex-BS细胞系的建立 | 第73-82页 |
| ·前言 | 第73-74页 |
| ·实验材料与方法 | 第74-75页 |
| ·实验材料 | 第74页 |
| ·质粒pBac(3×P3-EGFPafm)-Lex-BS的构建 | 第74页 |
| ·EndoFree质粒DNA大量抽提 | 第74页 |
| ·家蚕细胞Bm-12的培养 | 第74页 |
| ·转染 | 第74页 |
| ·荧光显微镜检测 | 第74-75页 |
| ·Southern blot分析 | 第75页 |
| ·反向PCR分析 | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-82页 |
| ·质粒pBac(3×P3-EGFPafm)-Lex-BS的构建结果 | 第75-76页 |
| ·EGFP-Lex-BS表达细胞的观察和分选结果 | 第76页 |
| ·Southern blot分析结果 | 第76-77页 |
| ·反向PCR分析结果 | 第77-82页 |
| 总结论 | 第82-83页 |
| 本研究创新点和下一步研究计划 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
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