中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
一、引言 | 第9-12页 |
二、材料和方法 | 第12-25页 |
1. 实验材料 | 第12-13页 |
1.1 实验动物 | 第12页 |
1.2 细胞系 | 第12页 |
1.3 主要试剂和抗体 | 第12-13页 |
1.4 载体和分子克隆 | 第13页 |
1.5 主要设备和软件 | 第13页 |
2. 基础试剂配方 | 第13-14页 |
2.1 细菌培养用 | 第13页 |
2.2 琼脂糖凝胶电泳用 | 第13页 |
2.3 免疫印迹相关试剂 | 第13-14页 |
2.4 细胞样品制备用 | 第14页 |
3. 实验方法 | 第14-25页 |
3.1 TRIM40基因敲除小鼠的鉴定和培育 | 第14-15页 |
3.2 小鼠腹腔来源巨噬细胞的提取与培养 | 第15-16页 |
3.3 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的提取与培养 | 第16页 |
3.4 细胞复苏、培养、传代和冻存 | 第16页 |
3.5 真核表达质粒构建 | 第16-18页 |
3.6 RNA病毒扩增与保存 | 第18页 |
3.7 真核细胞DNA质粒转染 | 第18-19页 |
3.8 真核细胞poly (I:C)转染 | 第19页 |
3.9 制备全细胞裂解液、SDS-PAGE及Western blot | 第19页 |
3.10 免疫共沉淀及二次免疫共沉淀实验 | 第19-20页 |
3.11 细胞总RNA的提取及反转录PCR | 第20-21页 |
3.12 普通PCR及DNA电泳 | 第21页 |
3.13 荧光定量PCR | 第21-23页 |
3.14 酶联免疫吸附实验 | 第23页 |
3.15 荧光素酶报告基因 | 第23页 |
3.16 小鼠病毒感染模型 | 第23-24页 |
3.17 病毒滴度的测定 | 第24页 |
3.18 实验结果的统计学分析 | 第24-25页 |
三、实验结果 | 第25-63页 |
1. TRIM40能够抑制RNA病毒引起的天然免疫信号通路活化 | 第25-30页 |
2. TRIM40能够抑制RLR介导的抗病毒天然免疫信号通路活化 | 第30-32页 |
3. TRIM40抑制RLR受体介导的NF-κB和IRF3活化 | 第32-35页 |
4. TRIM40抑制抗病毒天然免疫反应 | 第35-43页 |
4.1 TRIM40缺陷细胞的抗病毒免疫反应增强 | 第35-38页 |
4.2 TRIM40在体内抑制抗病毒免疫反应 | 第38-43页 |
5. TRIM40通过其CC结构域与MDA5及RIG-Ⅰ的CARD结构域结合 | 第43-48页 |
5.1 TRIM40可与MDA5及RIG-Ⅰ结合 | 第43-44页 |
5.2 TRIM40通过其CC结构域与MDA5及RIG-ⅠCARD结构域结合 | 第44-46页 |
5.3 MDA5和RIG-Ⅰ通过CARD结构域与TRIM40结合 | 第46-48页 |
6. TRIM40通过蛋白酶体途径介导MDA5及RIG-Ⅰ降解 | 第48-52页 |
7. TRIM40介导MDA5及RIG-Ⅰ的K27位和K48位泛素化修饰 | 第52-56页 |
8. TRIM40通过MDA5和RIG-Ⅰ的CARD结构域抑制RLR信号通路的活化 | 第56-61页 |
9. TRIM40对RLR信号通路的抑制不依赖于TRIM15、TRIM26和TRIM31 | 第61-63页 |
四、讨论 | 第63-69页 |
五、总结 | 第69-71页 |
参考文献 | 第71-79页 |
缩略词表 | 第79-81页 |
文献综述 | 第81-98页 |
参考文献 | 第89-98页 |
个人简历 | 第98-99页 |
致谢 | 第99-101页 |