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盐芥TsVP启动子核心区域的鉴定及其上游调控蛋白的功能分析
 
     论文目录
 
摘要第1-11页
Abstract第11-16页
符号说明第16-17页
第一章 前言第17-35页
   ·启动子的概念和分类第17-21页
     ·启动子的概念第17-18页
     ·启动子的分类第18-21页
       ·组成型启动子第19页
       ·组织特异型启动子第19-20页
       ·诱导型启动子第20-21页
   ·转录因子的概念和分类第21-24页
     ·转录因子的概念第21-22页
     ·转录因子作用的分子机理第22-23页
     ·植物逆境相关的转录因子第23-24页
       ·WRKY类转录因子第23页
       ·bZIP类转录因子第23页
       ·MYB类转录因子第23-24页
       ·AP2/EREBP类转录因子第24页
       ·NAC类转录因子第24页
   ·盐芥的研究进展第24-26页
     ·盐芥和拟南芥在盐胁迫条件下转录物组变化的比较第25页
     ·盐芥是耐盐耐旱研究的模式植物第25-26页
   ·H~+-PPase研究进展第26-29页
     ·H~+-PPase基因的克隆第27-28页
     ·H~+-PPase基因表达和活性水平的调控第28-29页
     ·TsVP基因的研究进展第29页
   ·核酸—蛋白质互作的生物化学研究方法第29-33页
     ·体外结合分析方法第29-31页
       ·硝化纤维膜过滤实验第29-30页
       ·足迹法第30页
       ·电泳迁移率变动实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)第30-31页
       ·Southwestern杂交第31页
     ·体内研究方法第31-33页
       ·非变性染色质免疫沉淀(nChIP)第31-32页
       ·变性(交联)染色质免疫沉淀(xChIP)第32页
       ·Re-ChIP第32页
       ·ChIP Chop第32页
       ·ChIP-on-chip (Chromatin immuno-precipitation based on microarray)第32-33页
   ·本工作的目的和意义第33-35页
第二章 盐芥TsVP启动子中盐诱导响应核心区域的鉴定第35-57页
   ·材料与方法第35-40页
     ·材料第35-36页
       ·植物材料及培养条件第35页
       ·菌株和质粒载体第35页
       ·培养基及药品试剂第35-36页
     ·试验方法第36-40页
       ·质粒的重组和转化第36页
       ·启动子的生物信息学分析以及缺失体的构建第36-37页
       ·拟南芥的转化和筛选第37-38页
       ·转基因拟南芥的分子生物学检测和组织化学分析第38-39页
       ·核心区域在烟草中的瞬时表达分析第39-40页
   ·实验结果与分析第40-54页
     ·启动子序列信息学分析第40-44页
     ·缺失突变体的构建第44-45页
     ·转基因拟南芥的筛选以及PCR鉴定第45-46页
     ·PT1转基因拟南芥的组织化学分析第46-48页
     ·PT2--PT9转基因拟南芥的组织化学分析第48-50页
     ·130bp序列的功能验证第50-53页
     ·130bp序列的生物信息学分析第53-54页
   ·讨论第54-57页
第三章 TsNac1和TsVOZ1的克隆和功能分析第57-82页
   ·材料与方法第57-68页
     ·材料第57-58页
     ·实验方法第58-68页
       ·质粒的重组和转化方法第58页
       ·构建酵母单杂交所用质粒第58-59页
       ·盐芥RNA的分离第59页
       ·盐芥cDNA合成第59-60页
       ·酵母菌株Y187的遗传转化第60-61页
       ·酵母质粒提取第61页
       ·阳性酵母质粒转化大肠杆菌第61页
       ·TsNac1和TsVOZ1基因全长的克隆第61-62页
       ·TsNac1和TsVOZ1蛋白原核表达第62-63页
       ·盐芥总蛋白及核蛋白的提取第63-64页
       ·凝胶阻滞试验测定目的蛋白与DNA结合活性第64页
       ·Real-time RT-PCR分析TsNac1和TsVOZ1在盐芥中的表达模式第64-65页
       ·植物过表达载体以及干扰载体的构建第65-66页
       ·拟南芥和盐芥的遗传转化与筛选第66-67页
       ·转基因材料耐盐性分析第67页
       ·抗体制备和Western blotting检测第67-68页
       ·统计学分析第68页
   ·实验结果与分析第68-80页
     ·诱饵质粒的构建第68-69页
     ·盐芥cDNA表达文库的制备第69页
     ·利用酵母单杂交试验筛选目的蛋白第69-72页
       ·cDNA表达文库质量的测定第69-70页
       ·盐芥cDNA表达文库的筛选第70-72页
     ·TsNac1和TsVOZ1全长基因的克隆及生物信息学分析第72页
     ·TsNac1和TsVOZ1的表达分析第72-74页
     ·TsNac1和TsVOZ1的原核表达第74-75页
       ·TsNac1和TsVOZ1的原核表达载体的构建第74页
       ·TsNac1原核表达蛋白的诱导与纯化第74-75页
       ·TsVOZ1原核表达蛋白的诱导与纯化第75页
     ·TsNac1重组蛋白与TsVP启动子中130bp序列的体外结合第75页
     ·抗体的制备第75-77页
     ·植物表达载体的构建第77页
     ·转基因拟南芥和转基因盐芥的产生第77-78页
     ·转基因拟南芥的耐盐性分析第78-80页
   ·讨论第80-82页
第四章 转录因子TsNac1调控基因的鉴定与初步分析第82-112页
   ·材料与方法第82-90页
     ·实验材料第82页
     ·实验方法第82-90页
       ·CHIP-on-chip分析第82-89页
       ·凝胶阻滞实验第89-90页
       ·Real-time RT-PCR验证CHIP-on-chip实验结果第90页
   ·实验结果第90-110页
     ·TsNac1在TsVP启动子中的结合位点鉴定第90页
     ·TsNac1蛋白的CHIP-on-chip结果分析第90-97页
     ·TsNac1蛋白部分靶基因的分析及实验结果验证第97-104页
     ·TsNac1蛋白部分靶基因的功能聚类分析第104页
     ·部分TsNac1蛋白结合基因的功能分析第104-110页
       ·具有转运体活性的蛋白第104-105页
       ·具有催化活性的蛋白第105-107页
       ·具有结构分子功能的蛋白第107页
       ·具有转录调控活性的蛋白第107-109页
       ·具有结合功能的蛋白第109-110页
   ·小结与讨论第110-112页
结语与展望第112-115页
参考文献第115-129页
附录1 异源过表达TsH3.1基因可以显著促进烟草的生长第129-136页
附录2 本实验中新克隆得到的基因序列第136-138页
在读期间发表论文以及申请专利第138-139页
致谢第139-140页
学位论文评阅及答辩情况表第140页

 
 
论文编号BS41235,这篇论文共140
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