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当前位置:教育论文中心首页--制药类毕业论文--细辛、辛夷挥发油β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响
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细辛、辛夷挥发油β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响

【制药类毕业论文】作者:马容 狄留庆 毕肖林 祖强【摘要】 :目的 研究穴贴定喘膏中细辛和辛夷挥发油的β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响。方法 挥发油分别用β-环糊精和HP-β-环糊精包合,采用Franz扩散装置,运用气相色谱法测定挥发油成分,考察β-环糊精和HP-β-环糊精包合对透皮吸收的影响。结果 β-环糊精包合物的累积透过率优于HP-β-环糊精包合物。结论 挥发油用β-环糊精包合可促进透皮吸收。
【关键词】 细辛 辛夷 挥发油 β-环糊精 HP-β-环糊精 透皮吸收
Abstract:Objective To study the preparation of volatile oils obtained from asarum and lily magnolia complexed with β-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin in Xuetie Dingchuan plaster, and to study its impacts of transdermal absorption. Methods The volatile oil was complexed with β-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin. GC method was used in the determination of volatile oils complexed with β-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin to investigate the impacts of transdermal absorption. Results The accumulation transmission of the volatile oils complexed with β-cyclodextrin was superior to that with hydroxypropyl-β-cyclodextrin. Conclusion The inclusion of volatile oils with β-cyclodextrin can enhance drug penetration via skin.
Key words:asarum;lily magnolia;volatile oils;β-cyclodextrin;hydroxypropyl-β-cyclodextrin;transdermal absorption
  细辛、辛夷是穴贴定喘膏中的主要组成中药,该制剂具有逐饮豁痰、利气平喘的功效,临床常用于治疗支气管哮喘和喘息性支气管炎。β-环糊精(β-CD)和HP-β-环糊精(HP-β-CD)包合都能够稳定芳香挥发性成分,本试验将穴贴定喘膏中芳香挥发性成分(细辛、辛夷挥发油)分别经β-CD和HP-β-CD包合,再通过体外透皮扩散试验,研究包合对体外经皮扩散的影响。
  1 试验材料
1.1 仪器
HP-4890D型气相色谱仪(中国惠普有限公司);WDL-95色谱工作站(中国科学院大连化学物理研究所);GA2000A低噪音空气泵(北京中兴汇利科技发展有限公司);GH-500B氢气发生器(北京中兴汇利科技发展有限公司);FA-1104型电子天平(上海天平仪器厂);TP-5型智能透皮扩散仪;磁力搅拌器(上海实验仪器厂);数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)。
1.2 动物
 健康SD大鼠,体重180~220 g,南京中医药大学实验动物中心提供。
1.3 试剂及药材
β-CD(国药集团化学试剂有限公司);HP-β-CD(泰兴市一鸣精细化工有限公司);细辛、辛夷药材(购于安徽,由南京中医药大学中药鉴定教研室吴德康教授鉴定)。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 挥发油空白回收率的测定
  取细辛、辛夷混合挥发油(1∶1)2 mL,置圆底烧瓶中,加蒸馏水150 mL及少许沸石,蒸馏5 h,用挥发油提取器提取挥发油,待冷却30 min后,测定挥发油体积,根据空白回收率=(回收的挥发油体积/加入的挥发油体积)×100%计算。结果表明,挥发油的空白回收率为90.3%。
2.2 挥发油β-环糊精包合物的制备
  参考文献[1-2],按照混合挥发油与β-CD为1∶1、1∶2、1∶4的比例,称取β-CD适量,加2倍量蒸馏水置研钵中研匀,取混合挥发油1.0 mL少量分次加入研钵,在40 ℃下研磨1 h,研磨混合物50 ℃真空干燥,包合物用无水乙醇洗涤,除去表面残留的挥发油,挥去乙醇,得β-CD包合物。
2.3 挥发油HP-β-环糊精包合物的制备
  按照混合挥发油与HP-β-CD为1∶1、1∶2、1∶4的比例,称取HP-β-CD适量,加2倍量蒸馏水置研钵中研匀,制法同β-CD包合物。
2.4 挥发油包结率的测定
取所制备的包合物置圆底烧瓶中,加入蒸馏水150 mL及少许沸石,蒸馏5 h,用挥发油提取器提取挥发油,待冷却30 min后测定挥发油体积,按下式计算挥发油包结率。结果见表1。表1 挥发油包结率测定结果(略)
挥发油包结率(%)=回收的挥发油体积 ×100加入的挥发油体积×空白回收率
试验结果表明,以1∶4进行包合时,包结率已基本达到所需要求,当进一步增加辅料的比例时,包结率未见显著增大,所以我们以1∶4进行包合。
2.5 透皮扩散试验
2.5.1 透皮前供试品的制备
考虑到β-CD包合物(1∶4包合)包结率约为HP-β-CD包合物(1∶4包合)的2倍,为保证供试品所含挥发油量平行,称取β-CD包合物2 g,HP-β-CD包合物4 g,置于锥形瓶中,用40%乙醇超声提取30 min,提取液滤过,用旋转蒸发仪浓缩,定容于5 mL容量瓶中。各吸取上述溶液1 mL于25 mL容量瓶中,40%乙醇定容,滤过,平行3份,供气相色谱检测用。
2.5.2 体外透皮扩散试验
取大鼠3只,脱毛膏脱毛,恢复24 h后处死,剥离腹部皮肤,刮去脂肪组织,置于生理盐水中备用。试验时取出,平展于TP-5型智能透皮扩散仪装置中,固定。称取β-CD包合物(1∶4包结)2 g,HP-β-CD包合物(1∶4包结) 4 g,分别置于鼠皮上,固定好装置(β-CD和HP-β-CD包合物各平行3份)。下层接受液为22 mL 40%乙醇溶液,磁力搅拌器恒速搅拌(300 r/min),整个装置放于37 ℃恒温水浴中。药物从给药室经皮渗透到接受室,于1、2、3、4、6、8、12、24 h各取接受液1 mL,并向装置中补充1 mL新鲜的接受液,得到不同时间点皮肤透过液。
2.5.3 气相色谱法测定不同时间接受液中挥发油的含量
色谱柱:HP-50+(Crosslinked 50% PH M E Siloxane),0.53 mm×30 m;柱温采用程序升温,初始温度145 ℃,维持2.5 min,以15 ℃/min的速率升至190 ℃,恒温6 min;载气为高纯氮气,柱前压5 psi;检测器:FID,260 ℃;进样口温度:260 ℃。
取透皮前供试品以及各时间点的皮肤透过液,每个样品进样2次,每次进样1 μL。色谱图见图1。
结果色谱图中在t=6.5 min的位置的峰,面积较大,且峰形较好,故选择此峰作为考察的依据。根据t=6.5 min峰的面积,计算各时间点累计释放百分率,结果见表2。表2 不同包合物对其累积透过率的影响(略)
从表2可以看出,β-CD包合物(1∶4包结)和HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率相差很大,二者经Paired Samples T test检验,有显著性差异(P=0.003)。这表明:β- CD包合物(1∶4包结)的累积透过率优于HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率。故我们在工艺中以β-CD代替HP-β-CD对挥发油进行包合。
  虽能取得一定的临床疗效,但却会出现相应的不良反应。笔者根据“肾藏精”、“主生殖”、“精血同源”、“精血互生”等理论,认为AsAb阳性导致的男性不育,其病机主要是肾虚、气血失和。肾虚精亏,气不化精,精不化血,血行无力,而形成肾虚血瘀。治疗当以补肾活血化瘀为法。方药以淫羊藿、蛇床子温肾壮阳为君药。熟地黄、紫河车、女贞子补肾益精、阴中求阳;山茱萸、枸杞子、菟丝子补肝肾;山药补肺脾肾之气而达全身;当归、桃仁活血祛瘀、通行血脉;五味子益气生津、补肾宁心,共为臣药。佐以茯苓、牡丹皮渗湿泄热;甘草解毒、调和诸药。现代药理研究表明,活血化瘀方药能通过增强血-睾屏障的功能,增加精浆免疫抑制因子的产生及提高精子内各种酶的活力,调整机体免疫机制与内在平衡,从而消除抗精子抗体或降低其活性,以治疗免疫性不育。
【参考文献】
[1] Madar J, Urbanek V, Chaloupkova A, et al. Role of sperm antibodies and cellular autoimmunity to sperm in the pathogenesis of male infertility[J]. Ceska Gynekol,2002,67(1):3.
[2] 何继永.外科疾病诊断标准[M].北京:科学出版社,2001.543.
[3] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S].1993.192.
[4] Dinitrora OK, Kalaidzhiewv SK, Nakov LS, et al. Methods for the detection of anti-sperm antibodies associated with immunologically- mediated human infertility[J]. A kush Ginekol(Sofiia),2002, 41(3):43.

 
 
 
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