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拳参正丁醇提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
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【西药学论文范文】作者：李良东，黄志华，余星梅，黎晓，曾靖【摘要】 目的研究拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步探讨其保护机制。方法大鼠大脑中动脉栓塞，制作脑缺血再灌注损伤模型，缺血后10 min，于舌下静脉给予不同剂量的拳参正丁醇提取物。再灌注24 h后，断头取脑，TTC染色，测定脑梗塞体积;取血，离心后，取血清，比色法测血清NOS、SOD的活性及NO、MDA的含量。结果与模型组相比，拳参正丁醇提取物治疗组脑梗塞体积减小，血清NOS和SOD的活性升高，NO含量升高，MDA含量降低。结论拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，其保护机制与拳参正丁醇提取物促进NO释放及增强氧自由基的清除有关。
【关键词】 拳参正丁醇提取物; 脑缺血再灌注损伤
Abstract：ObjectiveTo explore the therapeutic effects of n-Butyl alcohol extract of Polygonum bistorla L. on cerebral ischemia/reperfusion injury and its mechanism. MethodsA rat cerebral ischemia/reperfusion injury was made through embolization of the middle cerebral artery, and the injury was treated with n-Butyl alcohol extract of Polygonum bistorla L. , using sublingual vein injection. The cerebral tissue was stained using the TTC method, and the infarction volume was investigated. Moreover, the activities of NOS and SOD, and the levels of NO and MDA were also measured. ResultsAfter treatment, a reduction in the infarction volume and elevation in the activities of NOS and SOD in serum were observed. An elevation in NO level and a decrease in MDA level were also observed. Conclusionn-Butyl alcohol extract of Polygonum bistorla L. has certain therapeutic effects on cerebral ischemia/reperfusion injury by enhancing NO release and scavenging oxygen free radical.
Key words： Polygonum bistorla L. n-Butyl Alcohol Extract; Cerebral ischemia/reperfusion injury
拳参别名草河车，系蓼科植物的干燥根茎。具有清热、镇惊、利湿、消肿、镇痛等功效。拳参正丁醇提取物(Polygonum bistorla L. n-Butyl Alcohol Extract,PBNA)主要由4种成分组成[1]，包括丁香苷、儿茶素、芦丁、Mururin A。本课题组前期研究表明，拳参提取物具有抗心律失常[2]、镇痛 [3，4]、中枢抑制[5]、对心肌缺血[6]及心肌缺血再灌注损伤的保护[7]、扩张血管[8]等作用。拳参正丁醇提取物是否对脑缺血再灌注损伤起保护作用?本实验应用大鼠大脑中动脉栓塞所致的脑缺血再灌注损伤模型研究拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其保护作用与NO和抗氧化作用的关系。
1 材料
1.1 试剂及药物 拳参正丁醇提取物由沈阳药科大学中医药学院植化教研室提供，实验前用双蒸水稀释至所需浓度。NOS、SOD、NO、和MDA试剂盒购自南京建成生物有限公司。
1.2 动物SD大鼠购自江西中医学院实验动物中心，体重250～280 g，雄性(动物中心许可证号：2005-0001，动物合格证号：JZDW2006-076，级别：清洁级)。
2 方法
2.1 实验分组与大鼠脑缺血再灌注损伤模型的制备雄性SD大鼠32只，250～280 g，随机分成4组，即假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组、拳参正丁醇提取物高剂量(0.3 mg·kg-1)治疗组、拳参正丁醇提取物低剂量(0.1 mg·kg-1)治疗组。大鼠用10%水合氯醛溶液(350 mg·kg-1)麻醉，参照Longa等[9]的方法制备大脑中动脉阻断模型，将一尼龙线(长4 cm，直径0.2 mm)经颈总动脉主干切口缓慢向颈内动脉入颅方向推进，以颈总动脉分叉处为标记，推进18～20 mm感到轻微阻力时，即达到较细大脑前动脉，阻断大脑中动脉的所有血液供应，60 min后，拔出尼龙线并扎紧动脉残端，缝合皮下组织和皮肤，完成脑缺血再灌注损伤模型。假手术组大鼠只暴露和分离出颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，不闭塞大脑中动脉。术中严格控制室温在23～25℃。药物治疗组分别从舌下静脉注射不同剂量的拳参正丁醇提取物，假手术组和模型组给予同体积的生理盐水。
2.2 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞范围的影响再灌注24 h，用上述方法麻醉，断头处死大鼠，取脑，将前脑沿冠状面切成厚度基本相同的5片，脑片置于5ml 2%的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyl tetrazoliu chloride，TTC)染色溶液中，37℃避光孵育30min。经染色后非缺血区呈玫瑰红色，脑梗塞区呈灰白色。
2.3 血清生化指标测定再灌注24 h，大鼠麻醉后断头取血，4℃，3 000 r/min离心10 min，取血清，-80℃保存。严格按试剂盒说明，比色法测定血清NOS，SOD活性及NO，MDA含量。
2.4 统计学方法运用Prism4.0统计软件，对各剂量药物处理组与模型组之间进行单因素方差分析。P<0.05为有统计学意义。
3 结果
3.1 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤时脑梗塞范围的影响见图1。各剂量的拳参正丁醇提取物均能缩小脑梗塞范围，且表现出一定的剂量依赖性。
3.2 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤时血清NOS活性的影响 见图2。模型组的NOS活性较假手术组低，各剂量的拳参正丁醇提取物治疗后，均能升高血清NOS活性。但剂量依赖性不明显。
3.3 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤时血清NO含量的影响见图3。模型组的血清NO含量低于假手术组，两种剂量的拳参正丁醇提取物治疗后，血清NO含量均升高，且具有一定的剂量依赖性。
3.4 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤时血清SOD活性的影响见图4。模型组的血清SOD活性低于假手术组，高剂量的拳参正丁醇提取物治疗后，血清SOD活性升高。
3.5 拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤时血清MDA含量的影响见图3。模型组的血清MDA含量高于假手术组，两种剂量的拳参正丁醇提取物治疗后，血清MDA含量均降低，且具有一定的剂量依赖性。
4 讨论
脑梗塞范围的大小常用来衡量脑缺血再灌注损伤的程度。本实验结果表明，各剂量的拳参正丁醇提取物治疗组均能减小脑梗塞范围，说明拳参正丁醇提取物对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用。
由NOS催化形成的NO通过增加缺血区域的脑血流量，防止血小板聚集和白细胞黏附;NO又可阻断NMDA受体，阻止细胞内Ca2+的增加，故缺血中产生的NO具有保护作用。本实验证实，拳参正丁醇提取物能升高心肌缺血再灌注损伤时血清中的NO含量及NOS活性，可见其能通过增加NO释放对脑缺血再灌注损伤起保护作用。
氧自由基为众多自由基的前体物质,是造成神经元损伤的重要因素。脑缺血再灌注损伤过程中可产生大量氧自由基，造成脂质、蛋白质和核酸过氧化，从而导致生物膜破坏、神经元损伤。MDA是氧自由基引发的生物膜不饱和脂肪酸过氧化反应的代谢产物，SOD是生物体产生的一种天然抗氧化酶，它通过歧化反应清除体内生成的氧自由基，阻断脂质过氧化连锁反应。本实验显示，大鼠在脑缺血再灌注后，血清MDA含量升高，而SOD活性降低。给予拳参正丁醇提取物治疗后，SOD活性升高、MDA含量降低。说明PBNA对脑缺血再灌注损伤的保护机制与降低脑组织MDA含量，升高SOD活力，从而减轻由氧自由基介导的脂质过氧化反应，减轻缺血再灌注对脑细胞的损伤有关。
【参考文献】
[1] 刘晓秋，李维维，生可心，等.拳参正丁醇提取物的化学成分[J].沈阳药科大学学报，2006，23(1)：17.
[2] Zeng Jing，Huang Xian-hua，Lai Fei，et a1.Antiarrhythmic Efects of PolygoauraBistorta L.Agueous extract[J].Drug Development Research，2002，55(4)：264.
[3] 曾 靖，单热爱，钟 声，等.拳参水提取物镇痛作用的实验观察[J].中国临床康复，2005，9(6)：80.
[4] 黄玉珊，曾 靖，叶和杨，等.拳参正丁醇提取物的镇痛作用的研究[J].赣南医学院学报，2004，24(1)：12.
[5] 曾 靖，黄志华，叶和杨，等.拳参正醇提取物中枢抑制作用的研究[J].赣南医学院学报，2003，23(4)：359.
[6] 叶和杨，汪秀荣，黄志华，等.拳参正丁醇提取物对心肌缺血的影响[J].时珍国医国药，2006，17(6)：907.
[7] 叶和杨，黄志华，汪秀荣，等.拳参正丁醇提取物保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的剂量依赖性效应[J].中国临床康复，2005，9(39)：118.
[8] 李良东，黎 晓，黄志华，等.拳参正丁醇提取液对家兔胸主动脉条收缩的影响[J].中药药理与临床，2007, 23(6): 53.
[9] Longa E Z, Weinstein P R, Carlsons, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats [J].Stroke, 1989, 20 (1): 84.
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