| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-29页 |
| ·香料工业的国内外发展现状 | 第12-15页 |
| ·丁二酮的简介 | 第15-19页 |
| ·丁二酮的背景介绍 | 第15页 |
| ·丁二酮的生产方法 | 第15-16页 |
| ·丁二酮的代谢途径研究 | 第16-18页 |
| ·丁二酮的检测方法 | 第18-19页 |
| ·利用微生物发酵生产丁二酮的研究进展 | 第19-22页 |
| ·优化培养条件 | 第19-20页 |
| ·筛菌或者诱变育种 | 第20页 |
| ·基因工程育种 | 第20-22页 |
| ·过表达菌株的构建研究进展 | 第22-24页 |
| ·基因敲除菌株的构建研究进展 | 第24-27页 |
| ·本课题的研究内容 | 第27-29页 |
| 2 过量表达α-乙酰乳酸脱羧酶基因重组菌的构建和代谢产物分析 | 第29-51页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料和仪器 | 第29-33页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·酶和试剂 | 第30-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·K.pneumoniae CICC10011的耐药性分析 | 第33页 |
| ·ALDC基因的扩增 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒电转化克雷伯氏菌感受态细胞(参照NEB公司) | 第36-37页 |
| ·α-乙酰乳酸脱羧酶酶活的测定(参考GB20713和NOVO公司) | 第37-39页 |
| ·菌体浓的测定 | 第39页 |
| ·残糖和底物浓度的测定 | 第39-41页 |
| ·实验结果和讨论 | 第41-50页 |
| ·克雷伯氏菌的耐药性分析 | 第41页 |
| ·ALDC基因扩增及鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒PBR322-ALDC的构建及酶切验证 | 第42-43页 |
| ·重组菌株的筛选及验证 | 第43-44页 |
| ·α-乙酰乳酸脱羧酶酶活的测定 | 第44-45页 |
| ·重组菌生长代谢特性的研究 | 第45-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 3 α-乙酰乳酸脱羧酶基因敲除重组菌的构建和代谢产物分析 | 第51-67页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料和仪器 | 第51-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·溶液的配制 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-57页 |
| ·菌株基因组的提取 | 第52页 |
| ·ALDC基因的扩增 | 第52页 |
| ·重叠PCR | 第52-55页 |
| ·电转化 | 第55页 |
| ·重组菌的PCR验证 | 第55-56页 |
| ·α-乙酰乳酸脱羧酶酶活的测定 | 第56-57页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第57页 |
| ·残糖和底物浓度的测定 | 第57页 |
| ·实验结果和讨论 | 第57-65页 |
| ·ALDC基因的扩增 | 第57页 |
| ·重组DNA片段的获得 | 第57-58页 |
| ·重组菌的筛选及验证 | 第58-60页 |
| ·α-乙酰乳酸脱羧酶酶活分析 | 第60页 |
| ·重组菌株生长代谢特性的研究 | 第60-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录A 标准物校正因子计算 | 第73-74页 |
| 附录B 标准样品的气相图谱 | 第74-76页 |
| 附录C 乙酰乳酸脱羧酶基因测序结果 | 第76-78页 |
| 附录D 重叠基因片段测序结果 | 第78-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
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