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Sphingobium sp. BHC-A中六六六异构体降解基因的克隆与降解途径的研究
 
     论文目录
 
摘要第1-11页
ABSTRACT第11-14页
符号与缩略语说明第14-16页
前言第16-18页
文献综述第18-66页
 第一章 农药污染与生物修复第18-34页
  1.农药的污染第18-24页
   ·农药对水环境的污染第19页
   ·农药对土壤生态系统的污染第19-20页
   ·农药对大气的污染第20-21页
   ·农药对生物的影响第21-24页
  2.生物修复第24-34页
   ·生物修复的概念第24-25页
   ·生物修复的主力军—微生物第25-26页
   ·微生物降解的机制第26页
   ·参与微生物降解作用的生物化学过程第26-27页
   ·影响微生物降解的因素第27-34页
 第二章 六六六生物降解研究进展第34-50页
  1.概述第34-37页
   ·理化性质第34-35页
   ·六六六的生物毒性第35页
   ·六六六在环境中的残留状态第35-37页
  2.六六六的微生物降解第37-50页
   ·微生物对六六六降解的研究状况第37-38页
   ·微生物降解γ-HCH的途径第38页
   ·γ-HCH降解的相关基因研究第38-50页
 第三章 研究中所涉及的主要研究方法概述第50-66页
  1.降解菌株基因克隆方法概述第50-57页
   ·根据已知序列克隆基因第50-51页
   ·新基因的克隆方法第51-57页
  2.降解菌株代谢组学研究方法概述第57-66页
   ·代谢物组学研究的方法第58-66页
实验部分第66-146页
 第一章 a-HCH与γ-HCH降解基因的克隆第66-94页
  1.材料与方法第67-73页
   ·培养基与试剂第67页
   ·菌株与质粒第67-68页
   ·培养条件第68页
   ·引物的合成第68-69页
   ·大肠杆菌高效感受态细胞的制备及转化第69-70页
   ·Sphingobium sp.BHC-A基因组DNA的提取第70页
   ·质粒DNA的小量提取第70-71页
   ·PCR扩增反应体系的建立第71页
   ·PCR产物的纯化第71-72页
   ·PCR产物的T/A克隆第72-73页
   ·基因序列的测序第73页
   ·基因序列登录号第73页
  2.结果与分析第73-91页
   ·Sphingobium sp.BHC-A基因组DNA的提取第73-74页
   ·Sphingobium sp.BHC-A菌株降解γ-HCH的相关lin基因的克隆第74-91页
  3.小结第91页
  参考文献第91-94页
 第二章 β-HCH降解基因的克隆与表达第94-114页
  1.材料与方法第94-103页
   ·培养基与试剂第94-95页
   ·菌株与质粒第95页
   ·转座子的导入第95-96页
   ·β-HCH含量的检测第96页
   ·营养缺陷型菌株的筛选第96页
   ·菌体基因组DNA的提取第96页
   ·质粒DNA的小量提取第96页
   ·质粒DNA的大量提取第96-97页
   ·DNA酶切反应体系的建立第97页
   ·脱磷酸化载体pUC18的制备第97-98页
   ·高效感受态细胞的制备和转化第98页
   ·PCR法验证突变子基因组中的转座子片段第98-99页
   ·突变子中转座子侧翼序列的克隆第99-100页
   ·片段序列的测定与序列分析第100页
   ·功能互补试验第100-101页
   ·β-HCH降解基因的PCR扩增及高效表达载体的构建第101-102页
   ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析第102页
   ·β-HCH降解基因(linB2)的基因序列登录号第102-103页
  2.结果与分析第103-112页
   ·突变子的筛选第103-104页
   ·突变子中插入片段的验证第104-105页
   ·突变子BHC-A45的基因组DNA的完全酶切第105页
   ·基因组文库的构建第105-106页
   ·阳性克隆的筛选第106-107页
   ·对pBHCl中的质粒进行亚克隆并对转座子侧翼序列进行拼接第107-108页
   ·基因水平上的比较分析第108页
   ·功能互补实验第108-110页
   ·证明linB2基因就是β-HCH降解基因第110-112页
   ·linB2基因在E.coli BL21中表达的SDS-PAGE分析第112页
  3.小结第112-113页
  参考文献第113-114页
 第三章 LinB2转化β-HCH的产物的鉴定第114-124页
  1.材料与方法第114-115页
   ·培养基与试剂第114页
   ·菌株第114页
   ·粗酶液的制备第114-115页
   ·粗酶反应条件与提取第115页
   ·气质联机实验第115页
   ·核磁共振实验第115页
  2.结果与分析第115-121页
   ·鉴定β-五氯环己醇(β-PCHL)第115-118页
   ·鉴定β-2,3,5,6-四氯-1,4-环己二醇(β-TDOL)第118-120页
   ·鉴定β-TDOL为降解终产物第120-121页
  3.小结第121-122页
  参考文献第122-124页
 第四章 鉴定LinA与LinB2在δ-HCH降解过程中的作用第124-146页
  1.材料与方法第124-127页
   ·培养基与试剂第124页
   ·菌株第124页
   ·构建表达载体第124-125页
   ·粗酶液的制备第125-126页
   ·粗酶反应条件第126页
   ·δ-PCCH的制备第126页
   ·气相色谱条件第126页
   ·气质联机实验第126-127页
   ·核磁共振实验第127页
  2.结果与分析第127-142页
   ·表达载体的构建第127-128页
   ·LinB2对δ-HCH的转化作用与产物鉴定第128-130页
   ·LinA对δ-HCH的转化作用与产物鉴定第130-132页
   ·d-PCCH的合成第132页
   ·LinB2对δ-1,4-TCDN的转化与产物鉴定第132-134页
   ·LinB2对δ-PCCH的转化与产物鉴定第134-139页
   ·确定LinC2,LinX2和LinD2能否直接降解δ-HCH第139-140页
   ·确定d-TDOL,d-2,3,5-TCDL与d-DDOL在BHC-A中能否继续被降解第140-142页
  3.小结第142-143页
  参考文献第143-146页
全文总结第146-148页
博士论文创新点第148-150页
附录一 文中所用培养基及试剂配方第150-154页
附录二 攻读博士学位期间发表的论文目录第154-156页
致谢第156页

 
 
论文编号BS1204536,这篇论文共156
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