| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 叶酸背景介绍 | 第15-22页 |
| 1.1.1 叶酸的化学结构 | 第15页 |
| 1.1.2 叶酸的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.1.3 叶酸的多聚谷氨酸化 | 第16-17页 |
| 1.1.4 叶酸降解 | 第17-18页 |
| 1.1.5 叶酸的分布 | 第18页 |
| 1.1.6 叶酸的功能 | 第18-19页 |
| 1.1.7 叶酸缺乏 | 第19-20页 |
| 1.1.8 叶酸的补充 | 第20页 |
| 1.1.9 叶酸强化 | 第20-21页 |
| 1.1.10 5 -F-THF介绍 | 第21-22页 |
| 1.2 关联分析 | 第22-29页 |
| 1.2.1 关联分析与连锁分析的比较 | 第23-24页 |
| 1.2.2 连锁不平衡 | 第24页 |
| 1.2.3 LD的度量 | 第24-25页 |
| 1.2.4 LD的影响因素 | 第25页 |
| 1.2.5 关联分析策略与实施 | 第25-28页 |
| 1.2.6 关联分析的局限性 | 第28页 |
| 1.2.7 植物关联分析研究进展 | 第28-29页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-48页 |
| 2.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.1.2 基因型 | 第30页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 2.2 玉米干粉叶酸的提取 | 第31页 |
| 2.2.1 叶酸提取液的配制 | 第31页 |
| 2.2.2 玉米干粉叶酸提取 | 第31页 |
| 2.3 遗传转化及转基因植株鉴定 | 第31-37页 |
| 2.3.1 基因扩增和测序 | 第31-32页 |
| 2.3.2 KOD Plus扩增体系和反应条件 | 第32页 |
| 2.3.3 凝胶回收 | 第32-33页 |
| 2.3.4 LB培养基的配方 | 第33页 |
| 2.3.5 连接与转化 | 第33页 |
| 2.3.6 质粒小量提取 | 第33-34页 |
| 2.3.7 拟南芥过表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.3.8 拟南芥转基因及DNA提取鉴定 | 第34-37页 |
| 2.3.9 玉米中GFT1 的过表达和RNAi | 第37页 |
| 2.4 关联分析 | 第37-39页 |
| 2.4.1 全基因组关联分析 | 第37-38页 |
| 2.4.2 候选基因关联分析 | 第38页 |
| 2.4.3 条件关联分析 | 第38页 |
| 2.4.4 重测序和序列分析 | 第38页 |
| 2.4.5 连锁不平衡分析 | 第38页 |
| 2.4.6 连锁定位分析 | 第38-39页 |
| 2.4.7 eQTL定位 | 第39页 |
| 2.5 基因表达分析 | 第39-41页 |
| 2.5.1 RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.5.2 反转录 | 第40页 |
| 2.5.3 表达模式分析 | 第40-41页 |
| 2.6 蛋白表达纯化 | 第41-44页 |
| 2.6.1 基因的克隆和异源表达载体构建 | 第41页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-43页 |
| 2.6.3 试表达 | 第43页 |
| 2.6.4 大量表达 | 第43-44页 |
| 2.6.5 蛋白电泳缓冲液的配制 | 第44页 |
| 2.6.6 蛋白凝胶染色液的配制 | 第44页 |
| 2.6.7 蛋白凝胶脱色液的配制 | 第44页 |
| 2.7 亚细胞定位 | 第44-47页 |
| 2.7.1 溶液的配制 | 第44-46页 |
| 2.7.2 原生质体制备和转化 | 第46-47页 |
| 2.8 数据分析软件 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-74页 |
| 3.1 关联群体5-F-THF含量变异 | 第48-49页 |
| 3.2 5 -F-THF含量全基因关联分析 | 第49-56页 |
| 3.3 5 -F-THF含量候选基因关联 | 第56-57页 |
| 3.4 条件关联分析确认更多关联位点 | 第57-59页 |
| 3.5 玉米GFT1 的相关信息 | 第59-61页 |
| 3.6 eQTL定位 | 第61-62页 |
| 3.7 连锁分析 | 第62-65页 |
| 3.8 单倍型分析 | 第65-66页 |
| 3.9 利用转基因证明ZmGFT1 的功能 | 第66-69页 |
| 3.9.1 转基因拟南芥叶酸分析 | 第66-68页 |
| 3.9.2 转基因玉米叶酸结果分析 | 第68-69页 |
| 3.10 三维建模分析 | 第69-70页 |
| 3.11 共表达分析 | 第70-72页 |
| 3.12 亚细胞定位 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-83页 |
| 4.1 玉米籽粒中5-F-THF的含量变异 | 第74-75页 |
| 4.2 全基因关联分析发现显著影响5-F-THF含量的位点 | 第75-76页 |
| 4.3 利用候选基因关联分析发现更多影响5-F-THF含量的位点 | 第76-77页 |
| 4.4 连锁分析证明ZmGFT1 与叶酸代谢关联 | 第77-78页 |
| 4.5 GFT1 基因功能讨论 | 第78-83页 |
| 4.5.1 单倍型分析 | 第78页 |
| 4.5.2 蛋白结构预测分析 | 第78-79页 |
| 4.5.3 转基因植物分析 | 第79-80页 |
| 4.5.4 ZmGFT1 潜在功能分析 | 第80-81页 |
| 4.5.5 GFT1 的进化和C3、C4 植物的关系 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-96页 |
| 附录Ⅰ | 第96-125页 |
| 附表1 关联群体531 份玉米种质在三个环境下的叶酸含量 | 第96-116页 |
| 附表2 拟南芥中叶酸代谢相关基因和玉米中对应的叶酸代谢直系同源基因 | 第116-118页 |
| 附表3 共表达分析发现的叶酸代谢潜在的新基因 | 第118-123页 |
| 附表4 用于玉米RNA干扰转基因实验的两段序列 | 第123页 |
| 附表5 本文中用到的引物 | 第123-124页 |
| 附图1 玉米自交系B73中3个GFT基因的氨基酸序列比对 | 第124页 |
| 附图2 玉米和其他作物中GFT1 基因的比对结果 | 第124-125页 |
| 附录Ⅱ:个人简历 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
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