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微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白组学分析及诊断标识蛋白鉴定
 
     论文目录
 
致谢第5-6页
中英文缩略语表第6-12页
摘要第12-14页
第一部分 文献综述第14-21页
    1. 隐孢子虫概述第14-15页
        1.1 隐孢子虫概述第14页
        1.2 隐孢子虫生活史第14-15页
    2 隐孢子虫卵囊纯化及体外脱囊第15-17页
        2.1 隐孢子虫卵囊纯化分离第15-16页
        2.2 隐孢子虫体外脱囊第16-17页
    3. 隐孢子虫卵囊壁研究进展第17-18页
    4. 隐孢子虫蛋白质组学研究第18-19页
    5. 隐孢子虫检测和诊断研究进展第19-21页
第二部分 微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫卵囊壁分离纯化第21-30页
    1. 引言第21页
    2 材料和方法第21-26页
        2.1 材料第21-22页
            2.1.1 粪便样品来源第21页
            2.1.2 主要生物试剂第21页
            2.1.3 耗材与仪器第21-22页
                2.1.3.1 耗材第21-22页
                2.1.3.2 主要仪器第22页
            2.1.4 溶液配制第22页
        2.2 方法第22-26页
            2.2.1 隐孢子虫卵囊收集第22页
            2.2.2 安氏隐孢子虫虫种鉴定第22-24页
            2.2.3 隐孢子虫卵囊纯化第24-25页
            2.2.4 隐孢子虫体外脱囊第25页
            2.2.5 隐孢子虫卵囊壁分离纯化第25-26页
    3 结果和分析第26-28页
        3.1 隐孢子虫卵囊纯化结果第26-27页
        3.2 隐孢子虫脱囊率第27页
        3.3 隐孢子虫卵囊壁分离结果第27-28页
    4 结论和讨论第28-30页
第三部分 微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫卵囊壁定性蛋白组学第30-44页
    1. 引言第30页
    2 材料和方法第30-34页
        2.1 材料第30-31页
            2.1.1 卵囊壁来源第30页
            2.1.2 主要试剂与试剂盒第30-31页
            2.1.3 试验仪器第31页
            2.1.4 溶液配制第31页
            2.1.5 生物信息学分析软件第31页
        2.2 方法第31-34页
            2.2.1 样品准备第31-32页
            2.2.2 卵囊壁蛋白提取及浓度测定第32页
            2.2.3 SDS-PAGE分析第32页
            2.2.4 胰酶降解和HPLC分级第32-33页
            2.2.5 液相色谱-质谱联用分析第33页
            2.2.6 数据库搜索第33页
            2.2.7 蛋白注释及功能富集第33-34页
    3 结果和分析第34-41页
        3.1 蛋白提取质控第34-35页
        3.2 蛋白鉴定结果统计第35页
        3.3 鉴定到蛋白功能注释第35-39页
            3.3.1 鉴定到蛋白的功能分类第35页
            3.3.2 鉴定到蛋白的亚细胞定位分类第35-37页
            3.3.3 鉴定到蛋白的COG/KOG功能分类第37-39页
        3.4 鉴定到蛋白功能富集第39-41页
            3.4.1 KEGG通路富集第39页
            3.4.2 蛋白结构域富集第39-41页
    4 结论和讨论第41-44页
第四部分 微小隐孢子虫cgd7_5140和安氏隐孢子虫cand_020680基因的克隆表达与定位第44-60页
    1 引言第44页
    2 材料和方法第44-52页
        2.1 材料第44-45页
            2.1.1 虫株、质粒和菌株第44页
            2.1.2 试验试剂与试剂盒第44-45页
                2.1.2.1 主要试验试剂第44页
                2.1.2.2 主要试剂盒第44-45页
            2.1.3 主要仪器第45页
        2.2 方法第45-52页
            2.2.1 C.parvum和C.andersoni全基因组DNA提取第45页
            2.2.2 基因序列分析及引物设计合成第45页
            2.2.3 目的基因的PCR扩增第45-46页
            2.2.4 重组克隆载体的构建第46-48页
                2.2.4.1 Cpcgd7_5140和Cacand_020680PCR产物回收纯化第46页
                2.2.4.2 链接pMD18-T载体第46-47页
                2.2.4.3 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞第47页
                2.2.4.4 单菌落PCR验证及测序第47页
                2.2.4.5 重组克隆质粒的提取与双酶切鉴定第47-48页
                    2.2.4.5.1 重组克隆质粒的提取第47-48页
                    2.2.4.5.2 重组克隆质粒双酶切鉴定第48页
            2.2.5 重组表达载体的构建第48-49页
                2.2.5.1 pGEX-4T-1表达载体双酶切第48页
                2.2.5.2 目的基因与pGEX-4T-1表达载体的连接第48-49页
                2.2.5.3 重组表达载体的鉴定第49页
            2.2.6 重组蛋白的表达与验证第49-50页
                2.2.6.1 重组表达载体转化E.coli Rosetta第49页
                2.2.6.2 单菌落PCR验证及测序第49页
                2.2.6.3 重组蛋白的体外诱导表达第49页
                2.2.6.4 重组蛋白SDS-PAGE检测第49-50页
                    2.2.6.4.1 蛋白样品处理第49-50页
                    2.2.6.4.2 SDS-PAGE胶的配制第50页
                    2.2.6.4.3 SDS-PAGE电泳第50页
                2.2.6.5 Western-blot验证重组蛋白第50页
            2.2.7 重组蛋白的纯化及浓度测定第50-51页
            2.2.8 多克隆抗体的制备与检测第51-52页
                2.2.8.1 多克隆抗体的制备第51页
                2.2.8.2 多克隆抗体效价检测第51-52页
            2.2.9 目的蛋白在隐孢子虫卵囊上的表达定位第52页
    3 结果和分析第52-57页
        3.1 蛋白序列分析预测第52-53页
        3.2 Cpcgd7_5140和Cacand_020680序列扩增第53页
        3.3 重组克隆质粒验证与鉴定第53-54页
        3.4 重组表达质粒验证与鉴定第54页
        3.5 重组蛋白质的诱导表达、鉴定与纯化第54-56页
        3.6 多克隆抗体效价检测第56-57页
        3.7 隐孢子虫卵囊中目的蛋白的表达定位第57页
    4 结论和讨论第57-60页
        4.1 目的基因的选择第57页
        4.2 蛋白表达系统选择及纯化分析第57-58页
        4.3 抗血清的制备第58页
        4.4 重组蛋白在隐孢子虫卵囊上表达定位分析第58-60页
第五部分 结论和创新点第60-61页
参考文献第61-68页
ABSTRACT第68-70页

 
 
论文编号BS4734437,这篇论文共70
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