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小麦全长cDNA文库构建、测序与分析
 
     论文目录
 
第一章 绪论第1-43页
 1.植物功能基因组学研究进展第14-19页
   ·基因组学的概念第14-15页
   ·植物功能基因组学概述第15页
   ·植物功能基因组学主要研究内容第15-16页
   ·植物功能基因组学研究现状与发展趋势第16页
   ·植物功能基因组学研究技术与方法第16-18页
   ·小麦基因组学研究现状第18-19页
 2.EST技术研究进展第19-21页
   ·EST的概念第19-20页
   ·EST的应用第20-21页
     ·用于基因表达分析和新基因的发掘第20页
     ·基因组作图第20页
     ·基因表达差异的研究第20-21页
     ·用于制备DNA芯片第21页
     ·寻找其它序列特征第21页
   ·重要农作物EST研究进展第21页
 3 全长cDNA与全长cDNA文库的构建第21-34页
   ·普通cDNA文库第22页
   ·差减文库第22-24页
     ·差减文库的原理第22-23页
     ·差减cDNA文库的构建方法第23-24页
   ·均一化cDNA文库第24页
   ·全长cDNA文库第24-34页
     ·全长cDNA文库的特点第25页
     ·构建全长cDNA文库的方法及原理第25-32页
     ·重要生物全长cDNA克隆与测序研究进展第32-34页
 4 生物信息学研究进展第34-36页
   ·生物信息学产生背景第34页
   ·生物信息学概念第34页
   ·生物信息学研究内容第34-35页
   ·生物信息学的应用第35-36页
     ·序列对比第35页
     ·新基因的发现和鉴定第35页
     ·基因组序列信息的提取和分析第35-36页
     ·蛋白质结构和功能的预测第36页
     ·分子进化研究第36页
     ·利用生物信息学软件寻找候选分子标记第36页
     ·电子拼接第36页
 5 密码子使用偏爱性研究进展第36-37页
 6 普通小麦的分类、起源与多倍体特性第37-41页
   ·小麦的分类第37-38页
   ·普通小麦的基因组起源第38-39页
   ·小麦基因组起源研究方法第39页
   ·小麦基因组起源研究的对象第39-40页
   ·小麦的多倍体特性第40-41页
 7 实验设计第41-43页
   ·立项背景第41页
     ·小麦的起源与演化第41页
     ·大批量全长cDNA克隆是功能基因组学研究的重要战略资源第41页
   ·研究目的与实验内容第41-42页
   ·技术路线第42-43页
第二章 小麦全长cDNA文库构建第43-67页
 1 材料与方法第43-59页
   ·试验材料第43-46页
     ·文库构建所用的小麦材料第43-45页
     ·化学试剂、酶类以及试剂盒第45页
     ·引物第45-46页
   ·试验方法第46-59页
     ·总RNA提取第46页
     ·mRNA分离纯化第46-47页
     ·第一链cDNA合成第47-49页
     ·生物素标记第49-50页
     ·全长cDNA的捕获第50-52页
     ·末端转移酶加poly(G)第52页
     ·第二链合成第52-53页
     ·BsaⅠ酶切第53页
     ·cDNA纯化与分级第53-54页
     ·连接第54页
     ·包装第54-55页
     ·原始文库滴度检测第55页
     ·原始文库的扩增第55-56页
     ·噬粒环化第56页
     ·cDNA文库的单克隆保存第56页
     ·质粒文库的复制第56页
     ·质粒提取(96孔培养板)第56-57页
     ·测序第57-58页
     ·全长cDNA判别第58-59页
 2 结果分析第59-63页
   ·全长cDNA文库构建结果第59-63页
     ·总RNA提取及mRNA的分离纯化第59页
     ·cDNA文库滴度检测及库容量计算第59-61页
     ·插入片段检测第61-62页
     ·扩增文库的滴度检测第62页
     ·ABI 3730 XL DNA Analyzer测序体系确定第62-63页
 3 讨论第63-66页
   ·mRNA质量是构建高质量全长cDNA文库的基础第63页
   ·关于全长库构建方法的选择第63-64页
   ·对Cap-Trapper法的改良第64-66页
   1) 关于反转录引物选择第64页
   2) 关于全长cDNA定向克隆问题第64-65页
   3) 关于克隆插入方向问题第65页
   4) 关于文库构建流程简化问题第65页
   5) 关于构建过程中同位素示踪问题第65-66页
   6) 关于蓝白斑选择问题第66页
 本章结论第66-67页
第三章 小麦全长cDNA克隆大规模测序和序列的初步分析第67-86页
   ·概述第67-69页
     ·本研究整体思路第67页
     ·研究目标第67页
     ·研究工作流程第67页
     ·本地化生物信息分析平台构建第67-69页
   ·结果与分析第69-82页
     ·全长cDNA文库大规模测序第69-70页
     ·cDNA文库全长比例分析第70-72页
     ·大批量测序数据预处理第72页
     ·基于大规模全长cDNA序列的小麦基因GC含量分析第72页
     ·小麦基因密码子使用偏性分析第72-75页
     ·克隆的小麦全长cDNA中新基因的确定第75-76页
     ·小麦EST数据的GO注释第76-79页
     ·粗山羊草叶和根中差异表达基因分析第79-81页
     ·中国春可育花药与败育花药基因表达差异分析第81页
     ·不同倍性小麦基因表达特性第81-82页
 4.讨论第82-86页
   ·关于重要物种全长cDNA克隆测序项目研究进展第82页
   ·关于本研究中全长cDNA文库和全长cDNA序列的应用第82-83页
   ·关于大批量EST数据的预处理问题第83页
   ·关于大规模EST数据的聚类拼接问题第83-84页
   ·关于全长cDNA序列的批量注释与功能分类第84页
   ·关于从大批量全长cDNA文库中挖掘差异表达基因第84-85页
   ·关于物种GC含量与最优密码子使用特性的分析第85页
   ·关于作为多倍体典型的小麦中基因表达情况第85-86页
全文结论第86-87页
参考文献第87-100页
致谢第100-101页
作者简介第101页

 
 
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