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18S rDNA介导的乳酸克鲁维酵母整合型表达载体的构建及初步验证
 
     论文目录
 
摘要第3-4页
Abstract第4-5页
第一章 绪论第9-20页
    1.1 乳酸克鲁维酵母概述第9-13页
        1.1.1 乳酸克鲁维酵母的发现第9页
        1.1.2 乳酸克鲁维酵母的分类地位第9-10页
        1.1.3 乳酸克鲁维酵母作为优良宿主菌株在外源蛋白表达中的优势第10-12页
        1.1.4 乳酸克鲁维酵母的应用第12-13页
    1.2 乳酸克鲁维酵母表达系统的研究现状第13-16页
        1.2.1 表达载体第13页
        1.2.2 启动子第13-14页
        1.2.3 信号肽第14-15页
        1.2.4 筛选标记第15-16页
        1.2.5 报告基因第16页
    1.3 rDNA作为同源重组整合位点的研究第16-18页
        1.3.1 rDNA的结构及功能第17页
        1.3.2 rDNA在同源重组中的研究进展第17-18页
    1.4 本课题的立题意义及研究内容第18-20页
        1.4.1 立题意义第18-19页
        1.4.2 研究内容第19-20页
第二章 材料与方法第20-32页
    2.1 实验材料第20-25页
        2.1.1 质粒和菌株第20-21页
        2.1.2 引物第21页
        2.1.3 培养基第21-24页
        2.1.4 工具酶与主要试剂第24-25页
        2.1.5 实验溶液的配制第25页
        2.1.6 主要实验仪器和设备第25页
    2.2 实验方法第25-32页
        2.2.1 酵母染色体基因组的提取(酸性玻璃珠法)第25-26页
        2.2.2 目的片段PCR扩增第26页
        2.2.3 目的片段与载体的连接第26-27页
        2.2.4 常规分子生物学操作第27页
        2.2.5 E. coli JM109感受态细胞的制备及转化第27页
        2.2.6 K. lactis感受态细胞的制备及转化第27-28页
        2.2.7 重组菌菌落PCR验证第28页
        2.2.8 单拷贝整合重组菌的筛选第28页
        2.2.9 不同启动子调控下重组菌胞内EGFP的表达与检测第28-29页
        2.2.10 菌体的培养第29页
        2.2.11 AMP脱氨酶酶活性的检测第29-30页
        2.2.12 内参基因GAPDH的克隆及标准质粒的构建第30页
        2.2.13 GAPDH基因和AMPD基因RT-QPCR反应的标准曲线第30页
        2.2.14 K. lactis/pTRGA-amdS中AMPD基因拷贝数的测定第30-31页
        2.2.15 重组酵母生长曲线的测定第31页
        2.2.16 重组酵母菌株质粒稳定性分析第31-32页
第三章 结果与讨论第32-53页
    3.1 不同启动子在K. lactis GG799中的功能研究第32-40页
        3.1.1 缺失KlLAC4启动子功能的表达载体pKLAC1*的构建第32-33页
        3.1.2 启动子与报告基因egfp的克隆第33-34页
        3.1.3 重组表达载体pKLAC1*-promoter-egfp的构建第34-35页
        3.1.4 K. lactis/pKLAC1*-promoter-egfp的构建与验证第35页
        3.1.5 不同启动子调控下单拷贝整合重组菌的筛选第35-37页
        3.1.6 重组菌胞内EGFP的观察第37-38页
        3.1.7 重组菌荧光强度的定量测定第38-39页
        3.1.8 小结第39-40页
    3.2 不同信号肽在K. lactis GG799中的功能研究第40-44页
        3.2.1 信号肽与报告基因AMPD的克隆第40-41页
        3.2.2 重组表达载体pKLAC1-sp-AMPD的构建第41-42页
        3.2.3 K. lactis/pKLAC1-sp-AMPD的构建与验证第42页
        3.2.4 不同信号肽引导下单拷贝整合重组菌的筛选第42-43页
        3.2.5 重组菌AMP脱氨酶酶活的测定第43-44页
        3.2.6 小结第44页
    3.3 整合型表达载体pTRGA-amdS的构建及初步验证第44-53页
        3.3.1 功能元件、18S rDNA的克隆及组装第44-47页
        3.3.2 K. lactis/pTRGA-amdS的构建与验证第47-48页
        3.3.3 K. lactis/pTRGA-amdS中AMPD基因拷贝数的测定第48-50页
        3.3.4 重组菌AMPD基因拷贝数与AMP脱氨酶酶活的关系第50-51页
        3.3.5 培养基成分对K. lactis/pTRGA-amdS产酶的影响第51页
        3.3.6 整合载体对重组菌生长的影响第51-52页
        3.3.7 重组菌株稳定性测定第52页
        3.3.8 小结第52-53页
主要结论与展望第53-55页
    主要结论第53页
    展望第53-55页
致谢第55-56页
参考文献第56-61页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第61页
    期刊论文第61页
    参与工作的期刊论文第61页
    参与工作的科研项目第61页

 
 
论文编号BS2579238,这篇论文共61
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