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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--毛白杨线粒体抗坏血酸过氧化物酶(PtomitAPX)的功能分析
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毛白杨线粒体抗坏血酸过氧化物酶(PtomitAPX)的功能分析
 
     论文目录
 
摘要第3-6页
Abstract第6-7页
1 引言第14-24页
    1.1 活性氧第14-16页
        1.1.1 活性氧的产生第14页
        1.1.2 活性氧的清除第14-15页
        1.1.3 活性氧平衡第15页
        1.1.4 ROS的信号分子作用第15-16页
    1.2 抗坏血酸过氧化物酶第16-20页
        1.2.1 APX的不同亚型第16-17页
        1.2.2 生化特征第17-18页
        1.2.3 基因组特征第18页
        1.2.4 表达模式第18-20页
    1.3 线粒体第20-22页
        1.3.1 线粒体基因组第20-21页
        1.3.2 线粒体动力学研究第21页
        1.3.3 线粒体与植物的生长发育第21-22页
        1.3.4 线粒体ROS调控第22页
    1.4 本研究的意义第22-24页
2 毛白杨PtomitAPX和PtosAPX的表达分析第24-38页
    2.1 实验材料第24页
    2.2 使用工具、主要试剂和设备第24-25页
        2.2.1 使用工具第24页
        2.2.2 主要试剂第24页
        2.2.3 主要设备第24-25页
    2.3 实验方法第25-35页
        2.3.1 蛋白质二级结构分析第25页
        2.3.2 进化树分析第25页
        2.3.3 非生物胁迫处理野生型毛白杨组培植株第25页
        2.3.4 野生型毛白杨叶片总RNA的提取第25-26页
        2.3.5 总RNA样品中DNA的消化第26页
        2.3.6 逆转录合成cDNA第26-27页
        2.3.7 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测PtomitAPX和PtosAPX表达水平第27页
        2.3.8 毛白杨叶片线粒体提取第27-28页
        2.3.9 线粒体完整度检测第28页
        2.3.10 线粒体纯度检测第28-34页
        2.3.11 毛白杨叶片叶绿体提取第34页
        2.3.12 Western blot检测PtomitAPX和PtosAPX多克隆抗体特异性第34-35页
        2.3.13 ELISA检测PtomitAPX和PtosAPX在线粒体和叶绿体中的含量第35页
    2.4 结果与分析第35-38页
        2.4.1 蛋白质二级结构分析结果第35-30页
        2.4.2 进化树分析结果第30-31页
        2.4.3 表达模式的分析结果第31-33页
        2.4.4 分离线粒体的纯度检测结果第33-36页
        2.4.5 Western blot检测PtomitAPX和PtosAPX多克隆抗体特异性结果第36页
        2.4.6 PtomitAPX和PtosAPX在线粒体和叶绿体中的含量结果第36-38页
3 毛白杨PtomitAPX和PtosAPX的酶动力学检测第38-43页
    3.1 实验材料第38页
    3.2 主要试剂和设备第38页
        3.2.1 主要试剂第38页
        3.2.2 主要设备第38页
    3.3 实验方法第38-41页
        3.3.1 重组蛋白PtomitAPX和PtosAPX的原核表达第39页
        3.3.2 重组蛋白PtomitAPX和PtosAPX的蛋白纯化第39页
        3.3.3 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳检测第39-40页
        3.3.4 PtomitAPX和PtosAPX的酶动力学检测第40-41页
    3.4 结果与分析第41-43页
4 转基因毛白杨线粒体功能的分析第43-52页
    4.1 实验材料第43页
    4.2 主要试剂和设备第43-44页
        4.2.1 主要试剂第43页
        4.2.2 主要设备第43-44页
    4.3 实验方法第44-46页
        4.3.1 毛白杨叶片总RNA的提取第44页
        4.3.2 总RNA样品中的DNA消化第44页
        4.3.3 逆转录合成cDNA第44页
        4.3.4 qRT-PCR检测PtomitAPX表达量第44页
        4.3.5 ELISA检测PtomitAPX表达量第44页
        4.3.6 转基因株系形态学观察第44页
        4.3.7 线粒体形态学分析第44-45页
        4.3.8 线粒体膜电位差分析(JC-1荧光探针)第45页
        4.3.9 转基因植株线粒体内H_2O_2含量的测定第45-46页
        4.3.10 转基因植株线粒体内APX活力的测定第46页
    4.4 结果与分析第46-52页
        4.4.1 反义转基因效果第46-47页
        4.4.2 过表达转基因效果第47页
        4.4.3 反义和过表达转基因植株形态学结果第47-48页
        4.4.4 线粒体形态学分析结果第48-49页
        4.4.5 线粒体膜电位差分析结果第49-50页
        4.4.6 线粒体内H_2O_2含量与APX活力的分析第50-52页
5 转基因毛白杨悬浮细胞的研究第52-78页
    5.1 实验材料第52页
    5.2 主要试剂和设备第52-54页
        5.2.1 主要试剂第52-54页
        5.2.2 主要设备第54页
    5.3 实验方法第54-62页
        5.3.1 表达载体转化农杆菌LBA4404第54-55页
        5.3.2 毛白杨愈伤组织的诱导第55页
        5.3.3 毛白杨悬浮细胞系的建立第55页
        5.3.4 PtomitAPX转基因悬浮细胞系的获得第55-56页
        5.3.5 PtomitAPX转基因悬浮细胞系的的鉴定第56页
        5.3.6 转基因悬浮细胞的形态学观察第56页
        5.3.7 转基因悬浮细胞的透射电镜观察第56-57页
        5.3.8 线粒体形态学的研究第57页
        5.3.9 线粒体运动能力的研究第57页
        5.3.10 JC-1分析转基因悬浮细胞线粒体的膜电位差第57页
        5.3.11 转基因悬浮细胞线粒体ATP含量的分析第57-58页
        5.3.12 转基因悬浮细胞线粒体呼吸复合物活性的分析第58页
        5.3.13 转基因悬浮细胞ROS爆发位点的活体检测第58页
        5.3.14 转基因悬浮细胞线粒体内H_2O_2含量的检测第58-59页
        5.3.15 转基因悬浮细胞线粒体内AsA/DHA比值的检测第59页
        5.3.16 转基因悬浮细胞线粒体内GSH/GSSG比值的检测第59页
        5.3.17 转基因悬浮细胞线粒体内MDA含量的检测第59-60页
        5.3.18 转基因悬浮细胞线粒体蛋白质羰基化程度的检测第60-61页
        5.3.19 H_2O_2处理反义转基因悬浮细胞第61页
        5.3.20 H_2O_2处理过表达转基因悬浮细胞第61页
        5.3.21 AsA处理转基因悬浮细胞第61页
        5.3.22 激光共聚焦显微镜观察线粒体形态学第61页
        5.3.23 激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位差第61页
        5.3.24 过表达细胞线粒体内H_2O_2含量的分析结果第61页
        5.3.25 过表达细胞线粒体内ATP/ADP的分析结果第61页
        5.3.26 流式细胞仪检测细胞凋亡第61-62页
    5.4 结果与分析第62-78页
        5.4.1 野生型和PtomitAPX转基因悬浮细胞系的建立与鉴定第62-63页
        5.4.2 野生型和PtomitAPX转基因悬浮细胞系形态学观察第63-66页
        5.4.3 线粒体的形态学研究结果第66-67页
        5.4.4 线粒体功能的研究结果第67-69页
        5.4.5 反义转基因细胞的线粒体遭受氧化损伤第69-71页
        5.4.6 PtomitAPX的过表达使H_2O_2含量显著降低第71-72页
        5.4.7 H_2O_2和AsA处理反义细胞后线粒体的功能第72-74页
        5.4.8 H_2O_2和AsA处理过表达细胞后线粒体的功能第74-76页
        5.4.9 线粒体功能的异常对细胞凋亡的影响第76-78页
6 转录组分析毛白杨悬浮细胞中PtomitAPX对其它基因表达的影响第78-92页
    6.1 植物材料第78页
    6.2 实验方法第78-81页
        6.2.1 转基因悬浮细胞的处理第78页
        6.2.2 Trizol法提取毛白杨悬浮细胞总RNA第78-79页
        6.2.3 利用Oligo(dT)富集mRNA及转录和测序第79页
        6.2.4 标准信息分析第79-80页
        6.2.5 差异基因分析第80页
        6.2.6 差异基因GO富集分析第80-81页
    6.3 结果与分析第81-92页
        6.3.1 转录组测序原始数据的基本情况第81页
        6.3.2 Reads与参考基因组对比的情况第81-82页
        6.3.3 表达差异基因分析第82-83页
        6.3.4 差异基因GO功能富集分析第83-92页
7 结论与讨论第92-100页
    7.1 结论第92-95页
    7.2 讨论第95-100页
        7.2.1 PtomitAPX特异性定位于线粒体而PtosAPX双定位于线粒体和叶绿体第95-96页
        7.2.2 PtomitAPX是毛白杨线粒体中重要的活性氧控制者第96-97页
        7.2.3 H_2O_2含量影响氧化磷酸化效率和植物的生长第97-98页
        7.2.4 PtomitAPX影响毛白杨细胞凋亡程度第98-100页
参考文献第100-112页
个人简介第112-114页
导师简介第114-116页
获得成果目录清单第116-118页
致谢第118页

 
 
论文编号BS4398638,这篇论文共118
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