| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 引言及文献综述 | 第9-37页 |
| 1 引言 | 第9-11页 |
| ·香蕉的植物学分类 | 第9-11页 |
| ·香蕉的生物学特性 | 第11页 |
| 2 香蕉植株再生研究进展 | 第11-15页 |
| ·植物再生的主要途径 | 第12-15页 |
| 3 植物蛋白激酶研究进展 | 第15-28页 |
| ·植物蛋白激酶的发现 | 第15-16页 |
| ·植物蛋白激酶家族的分类 | 第16-17页 |
| ·植物体中蛋白质磷酸化及其调节机制 | 第17-19页 |
| ·蛋白激酶在植物体中的生理功能 | 第19-22页 |
| ·调控植物发育 | 第19-20页 |
| ·参与抗性作用 | 第20-21页 |
| ·参与激素信号传递 | 第21页 |
| ·参与光信号传递 | 第21-22页 |
| ·植物中的类受体蛋白激酶 | 第22-28页 |
| ·植物类受体蛋白激酶的分类 | 第23-25页 |
| ·具有S-结构域的受体蛋白激酶 | 第23页 |
| ·富亮氨酸重复区(leucine-rich repeats,LRRs)的受体蛋白激酶 | 第23-24页 |
| ·表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)类受体蛋白激酶 | 第24页 |
| ·肿瘤坏死因子受体(turnor necrosis factor receptor,TNFR)类受体蛋白激酶 | 第24-25页 |
| ·组氨酸受体蛋白激酶 | 第25页 |
| ·植物体中类受体蛋白激酶的生理功能 | 第25-28页 |
| ·调控植物发育 | 第25-27页 |
| ·参与抗性作用 | 第27页 |
| ·参与激素信号传递 | 第27-28页 |
| ·受体蛋白激酶的研究展望 | 第28页 |
| 4 基因功能鉴定 | 第28-36页 |
| ·基因功能鉴定的方法研究进展 | 第28-36页 |
| ·基因转导技术 | 第29-31页 |
| ·非病毒性表达载体 | 第29-31页 |
| ·病毒表达载体 | 第31页 |
| ·反义技术 | 第31-33页 |
| ·反义寡核苷酸技术(Antisense oligonucleotides,ASON) | 第31-32页 |
| ·反义RNA技术 | 第32页 |
| ·核酶(Ribozyme)技术 | 第32-33页 |
| ·基因剔除和转基因技术 | 第33页 |
| ·人工染色体的转导 | 第33-34页 |
| ·基因诱捕技术 | 第34页 |
| ·RNA干扰-基因功能研究的新途径 | 第34-36页 |
| ·RNA干扰的作用机理 | 第35页 |
| ·RNA干扰的作用特点 | 第35-36页 |
| ·RNA干扰的导入方式与应用 | 第36页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 第一章 香蕉高效再生体系的建立 | 第37-43页 |
| 1 材料和试剂 | 第37页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-42页 |
| ·材料处理 | 第37-38页 |
| ·胚培养途径 | 第38页 |
| ·材料培养 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| 3 结果分析 | 第42-43页 |
| 第二章 香蕉类受体蛋白激酶基因的克隆 | 第43-68页 |
| 1 从CDNA文库中筛选类受体蛋白激酶基因 | 第43-61页 |
| ·试剂与材料 | 第43页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-51页 |
| ·库液稀释倍数的确定 | 第43-45页 |
| ·库涂板杂交 | 第45-47页 |
| ·杂交探针的制备 | 第45-46页 |
| ·噬菌体平板制备 | 第46-47页 |
| ·滤膜制备和噬菌斑的转印 | 第47-48页 |
| ·杂交后洗膜 | 第48页 |
| ·免疫检测 | 第48页 |
| ·噬菌体环化与鉴定 | 第48-51页 |
| ·挑取单个分隔良好的噬菌斑环化 | 第48-49页 |
| ·碱法小量提取质粒 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定，测序 | 第50-51页 |
| ·重组阳性克隆菌的保存 | 第51页 |
| ·目的片段的序列测定及分析 | 第51页 |
| ·结果分析 | 第51-56页 |
| ·库液稀释倍数的确定 | 第51-52页 |
| ·库液涂板杂交 | 第52-56页 |
| ·稀释倍数确定 | 第52-53页 |
| ·噬菌斑原位杂交结果与分析 | 第53页 |
| ·噬菌体环化与鉴定 | 第53-54页 |
| ·目的片断测序与分析 | 第54-56页 |
| ·候选类受体蛋白激酶基因cDNA片断的Southern杂交分析 | 第56-61页 |
| ·香蕉基因组DNA的提取(CTAB法) | 第56-57页 |
| ·材料和试剂 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·候选类受体蛋白激酶基因cDNA片断的Southern杂交分析 | 第57-60页 |
| ·基因组DNA酶切消化 | 第57-58页 |
| ·探针的标记 | 第58页 |
| ·DNA的印记转移 | 第58-59页 |
| ·Southern杂交 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-61页 |
| ·基因组DNA EcoRⅠ、HindⅢ酶切 | 第60页 |
| ·Southern杂交结果 | 第60-61页 |
| 2 利用RACE的方法克隆类受体蛋白激酶基因 | 第61-68页 |
| ·香蕉总RNA的提取 | 第61-63页 |
| ·材料与试剂 | 第61页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·RNA反转录为5’和3’RACE-Ready cDNA及RACE扩增香蕉类受体蛋白激酶基因全长 | 第63-66页 |
| ·5’和3’RACE-Ready cDNA的制备 | 第63-64页 |
| ·5’和3’端RACE | 第64-65页 |
| ·扩增条带回收，连接T-Vector | 第65页 |
| ·感受态受体菌的制备 | 第65-66页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第66页 |
| ·碱法小量制备重组质粒 | 第66页 |
| ·PCR鉴定重组子 | 第66页 |
| ·RACE结果与分析 | 第66-68页 |
| ·硼酸法香蕉RNA提取，总RNA电泳 | 第66-67页 |
| ·5’和3’端RACE结果 | 第67页 |
| ·质粒提取后PCR鉴定结果 | 第67页 |
| ·结果分析 | 第67-68页 |
| 第三章 候选类受体蛋白激酶基因CDNA片断RNAI植物表达载体的构建 | 第68-78页 |
| 1 材料与方法 | 第68-72页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·实验所用菌种E.coli DH5α,pCAMBIA3301质粒由本实验室保存 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·pCAMBIA3301质粒载体的改造 | 第68-69页 |
| ·插入片段扩增 | 第69-70页 |
| ·引物设计 | 第69页 |
| ·向200μl的PCR管中依次加入下列样品 | 第69-70页 |
| ·回收，连接 | 第70页 |
| ·转化、筛选和鉴定 | 第70页 |
| ·PL-intron片段插入改造过的pCAMBIA3301质粒载体 | 第70-71页 |
| ·pCAMBIA3301-I酶切，正向(sense orientation)特异片段的插入 | 第71-72页 |
| ·pCAMBIA3301-S-I酶切，反向(anti-sense orientation)特异片段的插入 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-78页 |
| ·pCAMBIA3301质粒载体的酶切，见图3.1 | 第72页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第72-73页 |
| ·目的片断获得 | 第73页 |
| ·重组质粒的酶切及回收 | 第73-74页 |
| ·pCAMBIA3301-S-I-A重组阳性质粒酶切、PCR鉴定 | 第74-78页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第78-84页 |
| 1 结论 | 第78-79页 |
| 2 讨论 | 第79-84页 |
| ·香蕉再生体系的优化 | 第79-80页 |
| ·概述 | 第79页 |
| ·香蕉的受体系统(再生体系)可大致分为三类: | 第79-80页 |
| ·香蕉体细胞胚培养途径中的几个问题 | 第80页 |
| ·类受体蛋白激酶 | 第80-81页 |
| ·KNA干扰 | 第81-84页 |
| ·RNAi在植物功能基因鉴定中的应用 | 第82-83页 |
| ·RNAi技术的缺陷 | 第83页 |
| ·展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 缩写词(ABBREVIATION) | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
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