摘要 | 第1-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
第一章 前言 | 第14-32页 |
1.1 蔷薇科经济植物 | 第14-16页 |
1.2 蔷薇科植物的经济意义 | 第16-17页 |
1.3 蔷薇科作物生产现状 | 第17页 |
1.4 蔷薇科经济植物主要病毒的研究进展 | 第17-26页 |
1.4.1 李属坏死环斑病毒 | 第18-20页 |
1.4.2 苹果茎沟病毒 | 第20-22页 |
1.4.3 苹果花叶病毒 | 第22-23页 |
1.4.4 洋李矮缩病毒 | 第23-24页 |
1.4.5 侵染蔷薇科木本植物的其它病毒 | 第24-26页 |
1.5 植物病毒研究的方法学 | 第26-31页 |
1.5.1 生物学方法 | 第26-27页 |
1.5.2 电子显微镜技术 | 第27页 |
1.5.3 血清学方法 | 第27-28页 |
1.5.4 分子生物学方法 | 第28-31页 |
1.5.4.1 病毒dsRNA分析 | 第28-29页 |
1.5.4.2 PCR和RT-PCR技术 | 第29页 |
1.5.4.3 核酸杂交方法 | 第29-30页 |
1.5.4.4 基因芯片方法 | 第30页 |
1.5.4.5 异源双链泳动分析法 | 第30-31页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
1.6.1 研究内容 | 第31页 |
1.6.2 预期目标 | 第31-32页 |
第二章 蔷薇科植物病毒的多样性研究 | 第32-43页 |
2.1 材料与方法 | 第32-35页 |
2.1.1 毒源采集与保存 | 第32页 |
2.1.2 病毒双链RNA提取与病毒基因组分分析 | 第32-33页 |
2.1.3 感病植物的组织病变观察 | 第33-34页 |
2.1.4 ELISA实验步骤 | 第34页 |
2.1.5 寄主反应测定 | 第34页 |
2.1.6 总RNA提取 | 第34-35页 |
2.1.7 RT-PCR检测 | 第35页 |
2.2 结果与分析 | 第35-42页 |
2.2.1 蔷薇科植物病毒病田间症状 | 第35-36页 |
2.2.2 dsRNA分析结果 | 第36-38页 |
2.2.3 ELISA检测结果 | 第38-39页 |
2.2.4 寄主反应测定结果 | 第39-40页 |
2.2.5 病变组织观察 | 第40页 |
2.2.6 RT-PCR检测结果 | 第40-42页 |
2.3 小结 | 第42-43页 |
第三章 李属坏死环斑病毒分子克隆与序列分析 | 第43-63页 |
3.1 材料与方法 | 第44-48页 |
3.1.1 病毒分离物 | 第44页 |
3.1.2 酶与试剂 | 第44页 |
3.1.3 引物设计 | 第44页 |
3.1.4 病毒RNA模板的制备 | 第44页 |
3.1.5 RT-PCR和cDNA合成 | 第44-45页 |
3.1.6 PCR反应和目标片段的扩增 | 第45页 |
3.1.7 PCR产物回收 | 第45-46页 |
3.1.8 RNA玻片杂交 | 第46页 |
3.1.9 DNA片段的连接 | 第46-47页 |
3.1.10 感受态细胞的制备 | 第47页 |
3.1.11 重组质粒的转化 | 第47页 |
3.1.12 重组质粒DNA的制备(碱裂解法) | 第47-48页 |
3.1.13 重组质粒的鉴定 | 第48页 |
3.1.13.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第48页 |
3.1.13.2 菌液PCR鉴定 | 第48页 |
3.1.14 DNA测序和序列同源性比较 | 第48页 |
3.2 结果分析 | 第48-61页 |
3.2.1 PNRSV部分序列的cDNA的克隆 | 第48-50页 |
3.2.2 不同PNRSV分离物的序列分析 | 第50-51页 |
3.2.3 PNRSV分离物CP基因序列酶切位点分析 | 第51页 |
3.2.4 不同PNRSV分离物CP核苷酸序列同源性比较 | 第51-55页 |
3.2.5 不同PNRSV分离物CP氨基酸序列同源性比较 | 第55-59页 |
3.2.6 PNRSV分离物序列末端分析 | 第59-60页 |
3.2.7 玻片杂交结果 | 第60-61页 |
3.3 小结 | 第61-63页 |
第四章 侵染苹果的两种病毒的分子鉴定与检测 | 第63-81页 |
4.1 材料与方法 | 第64-67页 |
4.1.1 病毒分离物 | 第64页 |
4.1.2 酶与试剂 | 第64页 |
4.1.3 引物设计 | 第64-65页 |
4.1.4 总RNA模板的制备 | 第65页 |
4.1.5 RT-PCR和cDNA合成 | 第65-66页 |
4.1.6 PCR反应和目标片段的扩增 | 第66-67页 |
4.1.7 PCR产物回收 | 第67页 |
4.1.8 DNA片段的连接 | 第67页 |
4.1.9 感受态细胞的制备 | 第67页 |
4.1.10 重组质粒的转化 | 第67页 |
4.1.11 重组质粒DNA的制备(碱裂解法) | 第67页 |
4.1.12 重组质粒的鉴定 | 第67页 |
4.1.12.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第67页 |
4.1.12.2 菌液PCR鉴定 | 第67页 |
4.1.13 DNA测序和序列同源性比较 | 第67页 |
4.1.14 RNA玻片杂交 | 第67页 |
4.2 结果分析 | 第67-80页 |
4.2.1 ASGV和ASPV部分序列的cDNA的克隆 | 第67-69页 |
4.2.2 ASGV和ApMV分离物的序列分析 | 第69-70页 |
4.2.3 不同ASGV分离物CP核苷酸序列同源性比较 | 第70-71页 |
4.2.4 不同ASGV分离物CP氨基酸序列同源性比较 | 第71-73页 |
4.2.5 不同ApMV分离物CP核苷酸序列同源性比较 | 第73-76页 |
4.2.6 不同ApMV分离物CP氨基酸序列同源性比较 | 第76页 |
4.2.7 两种病毒的玻片杂交结果 | 第76-80页 |
4.3 小结 | 第80-81页 |
第五章 侵染甜樱桃的洋李矮缩病毒 | 第81-93页 |
5.1 材料与方法 | 第81-84页 |
5.1.1 病毒分离物 | 第81页 |
5.1.2 酶与试剂 | 第81-82页 |
5.1.3 引物设计 | 第82页 |
5.1.4 ELISA检测 | 第82页 |
5.1.5 总RNA模板的制备 | 第82页 |
5.1.6 RT-PCR和cDNA合成 | 第82页 |
5.1.7 PCR反应和目标片段的扩增 | 第82-83页 |
5.1.8 PCR产物回收 | 第83页 |
5.1.9 DNA片段的连接 | 第83页 |
5.1.10 感受态细胞的制备 | 第83页 |
5.1.11 重组质粒的转化 | 第83页 |
5.1.12 重组质粒 DNA的制备(碱裂解法) | 第83页 |
5.1.13 重组质粒的鉴定 | 第83-84页 |
5.1.13.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第83-84页 |
5.1.13.2 菌液PCR鉴定 | 第84页 |
5.1.14 DNA测序和序列同源性比较 | 第84页 |
5.2 结果分析 | 第84-92页 |
5.2.1 PDV序列的cDNA的克隆 | 第84-85页 |
5.2.2 PDV分离物的序列分析 | 第85-86页 |
5.2.3 不同PDV分离物CP核苷酸序列同源性比较 | 第86-87页 |
5.2.4 不同PDV分离物CP氨基酸序列同源性比较 | 第87-92页 |
5.3 小结 | 第92-93页 |
总讨论 | 第93-96页 |
参考文献 | 第96-102页 |
附件 | 第102-104页 |