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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--SARS病人组织中SARS冠状病毒全基因组克隆、序列分析及病毒样颗粒装配
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SARS病人组织中SARS冠状病毒全基因组克隆、序列分析及病毒样颗粒装配
 
     论文目录
 
原创性声明第1页
学位论文版权使用授权书第3-7页
摘要第7-9页
ABSTRACT第9-12页
第一章 SARS冠状病毒分子生物学进展第12-72页
 一 SARS-CoV基因组学研究进展第12-21页
 二 SARS-CoV非结构蛋白质分子生物学研究进展第21-30页
     ·SARS-CoV多聚蛋白的RNA加工酶类似物第22-25页
     ·SARS-CoV特异蛋白酶第25-29页
       ·SARS-CoV的PL2~(pro)酶第26页
       ·SARS-CoV的3CL~(pro)蛋白酶第26-29页
     ·SARS-CoV的其他非结构蛋白质第29-30页
 三 SARS-CoV主要结构蛋白质分子生物学第30-48页
     ·SARS-CoV S蛋白质分子生物学第30-41页
       ·S蛋白质概述第30-31页
       ·S蛋白质受体结合功能与SARS-CoV的受体第31-36页
       ·S蛋白质与膜融合第36-38页
       ·S蛋白质分子免疫学和膜融合抑制肽第38-41页
       ·S蛋白质其他细胞生理效应第41页
     ·SARS-CoV N蛋白质分子生物学和分子免疫学第41-45页
       ·SARS-CoV N蛋白质分子生物学第41-44页
       ·SARS-CoV N蛋白质分子免疫学第44-45页
     ·SARS-CoV E蛋白质和M蛋白质分子生物学第45-48页
       ·SARS-CoV E蛋白质分子生物学第45-47页
       ·SARS-CoV M蛋白质分子生物学第47-48页
 四 抗SARS-CoV疫苗及抗病毒药物研究第48-59页
     ·SARS-CoV疫苗第48-56页
       ·SARS-CoV灭活病毒疫苗第49-50页
       ·SARS-CoV重组蛋白质疫苗与SARS-CoV病毒感染抑制性肽第50-53页
       ·SARS-CoV DNA疫苗第53-54页
       ·SARS-CoV DNA免疫与SARS病毒蛋白质疫苗联合应用第54-55页
       ·SARS-CoV重组活载体疫苗第55-56页
     ·干扰素和小分子治疗药物第56-59页
       ·干扰素第57页
       ·小分子治疗药物第57-59页
 五 SARS-CoV动物感染试验模型第59-60页
 六 结语第60页
 七 本章参考文献第60-72页
第二章 SARS冠状病毒的分离培养和鉴定第72-85页
 一、材料和方法第72-79页
   ·材料第72-73页
     ·病毒分离标本和分离细胞第72-73页
     ·试剂、载体、实验仪器和实验场所第73页
   ·方法第73-79页
     ·病毒的细胞分离培养第73-75页
     ·细胞分离物的收获第75页
     ·病毒培养物鉴定第75-76页
     ·套式RT-PCR鉴定SASR-CoV特异性病毒RNA第76-77页
     ·特异性扩增片段的回收克隆和测序第77-79页
     ·病毒的滴定第79页
 二、结果第79-83页
  1.病料接种培养的Vero细胞产生CPE现象第79-80页
  2.电镜观察到感染细胞培养上清中存在冠状病毒样粒子第80页
  3.病料接种Vero培养细胞与SARS病人康复期血清特异性结合第80页
  4.SARS-CoV病毒特异性核酸序列分析结果第80-81页
  5.分离的SARS-CoV病毒滴度一时间变化关系第81-83页
 三、讨论第83-84页
 四、小结第84页
 五、参考文献第84-85页
第三章 SARS病人肺组织中SARS-COV全基因组CDNA克隆及序列分析第85-113页
 一、材料与方法第85-89页
   ·材料第85-86页
     ·RNA模板第85页
     ·克隆引物第85-86页
     ·PCR仪、工具酶和其他分子生物学常用试剂第86页
   ·方法第86-89页
     ·RNA模板提取第86页
     ·SARS-CoV-5#全基因组cDNA克隆第86-89页
 二 结果第89-92页
  1.目的片段的克隆和重组质粒初步PCR鉴定第89页
  2.SARS-CoV-5#全基因组cDNA克隆测序第89-92页
 三、讨论第92-96页
 四、本章小结第96页
 五、参考文献第96-97页
 六、本章附录第97-113页
  1 本章附表第97-100页
  2.本章附录链接地址第100-101页
  3.SARS-CoV-5#测序结果第101-113页
第四章 SARS冠状病毒结构蛋白质基因的表达及其病毒样颗粒的包装试验第113-134页
 一 材料和方法第113-122页
     ·材料第113-114页
       ·细胞、毒株第113页
       ·试剂和抗体第113-114页
     ·方法第114-122页
       ·末端重叠拼接PCR法.人工合成密码子优化SASR-CoV结构蛋白质E基因第114-115页
       ·末端重叠拼接PCR人工合成密码子优化SASR-CoV结构蛋白质M基因第115-117页
       ·完整M基因组装和测序第117页
       ·PCR方法在M基因C末端引入肽标签FLAG第117-118页
       ·表达SARS-CoV主要结构蛋白质基因重组杆状病毒载体的构建第118-120页
       ·重组冠状病毒的包装和滴定第120-121页
       ·感染重组杆状病毒的细胞内SARS-CoV结构蛋白质基因表达的检测第121页
       ·重组杆状病毒感染Sf9细胞形成细胞内SARS-CoV VLP第121-122页
 二、结果第122-128页
  1 优化密码子合成的M、E基因的鉴定第122页
  2 含SARS-CoV结构蛋白质基因杆状病毒重组转座质粒的构建第122页
  3 表达SARS-CoV结构蛋白质的重组杆状病毒的获得与鉴定第122-126页
   1) 重组杆状病毒基因组Bacmid的PCR鉴定第122-125页
   2) 重组杆状病毒基因组Bacmid细胞转染包装病毒第125页
   3) 重组杆状病毒表达SARS-CoV结构蛋白质的检测第125-126页
  4 SARS-CoV VLP的装配第126-128页
 三、讨论第128-131页
 四、本章小结第131页
 五、参考文献第131-132页
 六、本章附录第132-134页
攻读学位期间发表的学术论文目录第134-135页
致谢第135页

 
 
论文编号BS1072939,这篇论文共135
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