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斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白的鉴定及定位研究
 
     论文目录
 
摘要第1-12页
ABSTRACT第12-14页
缩略词表第14-16页
第一章 文献综述第16-33页
 引言第16-17页
 1 斑点叉尾鮰病毒性疾病第17-23页
   ·流行病学特征第17-18页
   ·病理特征第18-20页
   ·血清学第20页
   ·潜伏期第20-21页
   ·斑点叉尾鮰疱疹病毒病的防控技术第21-23页
 2 斑点叉尾鮰病毒第23-28页
   ·分类地位第23-24页
   ·理化性质第24页
   ·斑点叉尾鮰病毒的生长、繁殖第24页
   ·分子生物学特性第24-27页
     ·基因组第24-25页
     ·斑点叉尾鮰病毒编码蛋白质第25-27页
   ·糖蛋白在病毒个体相互作用中的重要性第27-28页
 3 斑点叉尾鮰病毒病的诊断和检测技术第28-31页
   ·PCR-ELISA技术及应用第29-31页
 4 研究目的与意义第31-32页
   ·斑点叉尾鮰疱疹病毒囊膜蛋白特性和定位研究的目的与意义第31页
   ·斑点叉尾鮰疱疹病毒检测方法研究的目的与意义第31-32页
 5 本研究的总体设计和技术路线第32-33页
第二章 斑点叉尾鮰疱疹病毒ORF10基因的克隆与原核表达第33-52页
 1 材料与方法第33-43页
   ·实验材料第33-36页
     ·本实验使用的生物材料和原核表达载体第33-34页
     ·细胞培养使用的主要试剂第34-35页
     ·原核表达载体使用的主要试剂第35页
     ·蛋白表达和纯化使用的主要试剂第35页
     ·DNA和蛋白质分子量标准第35-36页
     ·实验所用仪器设备及产地第36页
   ·实验方法第36-43页
     ·细胞培养、病毒增殖和病毒DNA提取第36-37页
       ·细胞培养第36-37页
       ·病毒增殖第37页
       ·病毒DNA提取第37页
     ·病毒基因组DNA的PCR扩增和检测第37-39页
       ·特异性引物的设计第37页
       ·PCR扩增第37-38页
       ·PCR扩增产物的检测第38-39页
     ·构建原核表达载体第39-41页
       ·PCR扩增产物的纯化第39页
       ·目的片段的连接第39页
       ·目的片段的转化第39-40页
       ·重组表达质粒的鉴定第40-41页
     ·诱导表达第41-42页
       ·E.coli AD494(DE3)感受态的制备第41页
       ·阳性重组子的转化第41页
       ·目的基因的诱导表达第41-42页
       ·SDS-PAGE分析第42页
     ·表达蛋白的纯化第42页
       ·收集包涵体第42页
       ·亲和层析法纯化蛋白第42页
     ·表达蛋白的Western Blot检测第42-43页
 2 结果与分析第43-50页
   ·CCO细胞的培养第43页
   ·CCV的增殖第43-45页
   ·ORF10的PCR扩增琼脂糖凝胶电泳检测第45页
   ·重组表达载体的酶切鉴定第45-46页
   ·重组表达载体的测序鉴定第46页
   ·ORF10在大肠杆菌中的诱导表达第46-50页
     ·不同时间诱导表达结果第46-48页
     ·Western Blot分析第48页
     ·表达产物的可溶性分析第48-50页
 3 讨论第50-52页
第三章 斑点叉尾鮰疱疹病毒orf10基因鉴定及定位研究第52-64页
 1 材料和方法第52-56页
   ·实验材料第52-53页
     ·细胞、病毒和免疫兔第52-53页
     ·试剂和耗材第53页
     ·仪器和设备第53页
   ·实验方法第53-56页
     ·CCV病毒分离纯化第53页
     ·透射电子显微镜(TEM)负染观察病毒第53-54页
     ·病毒囊膜和核衣壳的分离与制备第54页
     ·多克隆抗体的制备和检测第54-55页
       ·抗血清的制备第54页
       ·抗血清的Western Blot分析第54-55页
     ·蛋白免疫印迹第55页
     ·免疫电子显微第55-56页
     ·中和保护试验第56页
 2 结果与分析第56-62页
   ·CCV病毒粒子的电子显微镜负染图片第56页
   ·抗血清的特异性检测第56-57页
   ·蛋白免疫印迹和orf10功能特性第57-59页
   ·免疫电子显微和orf10囊膜蛋白在病毒粒子中的物理定位第59页
   ·体外中和试验和orf10功能特性第59-62页
 3 讨论第62-64页
第四章 斑点叉尾鮰病毒ORF6基因的高效可溶表达及抗原性分析第64-70页
 1 材料与方法第64-66页
   ·菌株与载体第64-65页
   ·酶类及主要生化试剂第65页
   ·目的基因的重组表达载体pGEX-4T-2-ORF6的构建第65页
   ·重组质粒在大肠杆菌中的可溶表达第65-66页
   ·融合蛋白GST-GP6的纯化第66页
   ·Western-Blot免疫印迹第66页
 2 结果与分析第66-69页
   ·原核重组表达质粒pGEX-4T-2-GP6的酶切鉴定序列测序第66-67页
   ·原核重组表达质粒pGEX-4T-2-ORF6的蛋白表达鉴定第67-68页
   ·重组蛋白GST-GP6的分离纯化第68页
   ·重组蛋白的免疫原性鉴定第68-69页
 3 讨论第69-70页
第五章 斑点义尾鮰病毒PCR—ELISA检测方法的建立第70-93页
 1 材料与方法第70-78页
   ·实验材料第70-73页
     ·实验用鱼第70页
     ·细胞系、病毒和菌株第70-71页
     ·主要仪器设备及产地第71页
     ·主要试剂及药品第71-72页
     ·主要培养基第72页
     ·引物和探针第72-73页
   ·实验方法第73-78页
     ·斑点叉尾鮰病料的制备第73页
     ·细胞的培养和病毒的增殖第73页
     ·病毒DNA提取第73-74页
     ·生物素标记的PCR扩增和检测第74-75页
     ·ELISA最佳反应条件的确定第75-76页
       ·包被条件优化第75页
       ·杂交条件优化第75-76页
       ·显色条件优化第76页
     ·Cutoff值的确定第76页
     ·特异性检验第76-77页
     ·敏感性检验第77页
     ·扩增模板量回归分析第77页
     ·重复性试验第77-78页
     ·样品检测第78页
     ·数据处理第78页
 2 结果与分析第78-89页
   ·斑点叉尾鮰病毒orf6基因PCR扩增产物电泳检测结果第78-79页
   ·序列测定第79页
   ·斑点叉尾鮰病毒PCR-ELISA检测方法的建立第79-84页
     ·包被条件优化结果第79-81页
     ·杂交条件优化结果第81-82页
       ·地高辛探针最佳浓度的确定第81页
       ·最佳杂交退火温度的确定第81-82页
       ·最佳杂交退火时间的确定第82页
     ·显色条件优化结果第82-83页
     ·杂交和ELISA步骤第83-84页
   ·cutoff值的确定第84页
   ·特异性实验第84-85页
   ·灵敏度实验第85-86页
   ·模板DNA量与D405nm值的相关性第86-87页
   ·重复性试验第87页
   ·样品检测结果第87-89页
 3 讨论第89-91页
   ·PCR-ELISA检测技术的优越性第89页
   ·PCR产物的包被第89-90页
   ·杂交程序的选择第90页
   ·杂交条件的优化第90-91页
   ·方法特异性第91页
   ·方法敏感性第91页
 4 小结第91-93页
参考文献第93-104页
附录Ⅰ:主要试剂配制方法第104-110页
附录Ⅱ:研究生在读期间发表的论文第110-111页
致谢第111页

 
 
论文编号BS12439,这篇论文共111
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