| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 生物燃料乙醇转化平台—酿酒酵母 | 第14-15页 |
| 1.2 酿酒酵母热胁迫损伤 | 第15-16页 |
| 1.3 酿酒酵母的耐热机制 | 第16-22页 |
| 1.3.1 热激酿酒酵母基因表达响应 | 第16-17页 |
| 1.3.2 热休克蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3.3 海藻糖与酿酒酵母耐热机制 | 第18-19页 |
| 1.3.4 ATPase | 第19页 |
| 1.3.5 泛素-蛋白酶体途径与酿酒酵母耐热机制 | 第19-20页 |
| 1.3.6 抗氧化防御系统与酿酒酵母耐热性 | 第20-22页 |
| 1.3.6.1 酶促防御体系 | 第20-21页 |
| 1.3.6.2 非酶促防御体系 | 第21-22页 |
| 1.4 嗜热微生物耐热机制 | 第22-23页 |
| 1.5 酿酒酵母耐热性改造研究 | 第23-27页 |
| 1.5.1 非理性育种技术 | 第23-24页 |
| 1.5.2 理性育种技术 | 第24-27页 |
| 1.5.2.1 基于酿酒酵母耐热机制提高酿酒酵母耐热性 | 第24-25页 |
| 1.5.2.2 嗜热微生物在微生物耐热性改造方面的应用 | 第25-27页 |
| 1.6 研究意义及研究路线 | 第27-29页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第27-28页 |
| 1.6.2 研究路线 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-33页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.3 药品及试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 实验溶液配制 | 第31-32页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-46页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的活化与培养 | 第33页 |
| 2.2.2 酿酒酵母S. cerevisiae的活化与培养 | 第33页 |
| 2.2.3 酿酒酵母基因组的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第34页 |
| 2.2.5 目的基因及调控元件的扩增 | 第34-37页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶DNA回收 | 第37页 |
| 2.2.7 重叠延伸PCR（OE-PCR） | 第37-38页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的提取 | 第38页 |
| 2.2.9 质粒和DNA同步双酶切连接 | 第38-39页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.11 大肠杆菌热激转化 | 第40页 |
| 2.2.12 菌落PCR | 第40-41页 |
| 2.2.13 酿酒酵母感受态的制备 | 第41页 |
| 2.2.14 酿酒酵母电击转化 | 第41-42页 |
| 2.2.15 酿酒酵母同源重组 | 第42页 |
| 2.2.16 酿酒酵母质粒的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.17 酿酒酵母恒定高温培养 | 第43页 |
| 2.2.18 酿酒酵母生长曲线的测定 | 第43页 |
| 2.2.19 酿酒酵母点滴平板法和梯度稀释涂板法测定活菌数 | 第43-44页 |
| 2.2.20 酿酒酵母乙醇产量及残糖测定 | 第44页 |
| 2.2.21 酿酒酵母 50℃高温热激实验 | 第44-46页 |
| 第三章 抗氧化蛋白元器件的构建 | 第46-58页 |
| 3.1 抗氧化功能基因的挖掘 | 第46-47页 |
| 3.2 抗氧化功能基因的克隆 | 第47-49页 |
| 3.3 抗氧化蛋白元器件的构建 | 第49-53页 |
| 3.4 抗氧化蛋白元器件转染酿酒酵母工程菌的构建 | 第53-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-58页 |
| 第四章 酿酒酵母工程菌的表征 | 第58-83页 |
| 4.1 SOD元器件转染酿酒酵母工程菌表征 | 第58-64页 |
| 4.1.1 含SOD元器件酿酒酵母工程菌 37℃表征结果 | 第58-61页 |
| 4.1.2 含SOD元器件酿酒酵母工程菌 40℃表征结果 | 第61-64页 |
| 4.2 Prx元器件和CAT元器件转染酿酒酵母工程菌表征 | 第64-70页 |
| 4.2.1 含Prx元器件和CAT元器件酿酒酵母工程菌 37℃表征结果 | 第64-66页 |
| 4.2.2 含Prx元器件和CAT元器件酿酒酵母工程菌 40℃表征结果 | 第66-68页 |
| 4.2.3 含Prx元器件和CAT元器件酿酒酵母工程菌 50℃高温耐受性测定 | 第68-70页 |
| 4.3 Trx元器件转染酿酒酵母表征 | 第70-75页 |
| 4.3.1 含Trx元器件酿酒酵母工程菌 37℃表征结果 | 第70-72页 |
| 4.3.2 含Trx元器件酿酒酵母工程菌 40℃表征结果 | 第72-75页 |
| 4.4 TrxR元器件与NAD(H)激酶元器件转染酿酒酵母表征 | 第75-81页 |
| 4.4.1 含TrxR元器件和NAD(H)元器件酿酒酵母工程菌 37℃表征结果 | 第75-78页 |
| 4.4.2 含TrxR和NAD(H)元器件酿酒酵母工程菌 40℃表征结果 | 第78-81页 |
| 4.5 小结 | 第81-83页 |
| 第五章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83-84页 |
| 5.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
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